1、目的：探討細(xì)胞外信號調(diào)節(jié)激酶(Extracellular-signal Regulated Protein Kinase ERK)在δ-氨基酮戊酸光動力療法(5-Aminolevulinic Acid for Photodynamic Therapy ALA-PDT)殺傷皮膚鱗狀細(xì)胞癌(Squamous Cell Carcinoma SCL-1)細(xì)胞中的作用及機(jī)制,為ALA-PDT治療皮膚鱗狀細(xì)胞癌提供新的實(shí)驗室依據(jù)。
　　方法：

2、將SCL-1細(xì)胞分為空白對照組(con組),紅光照射組,ALA組,ALA-PDT組,ERK阻斷劑組。用western-blot檢測各組細(xì)胞干預(yù)30min,60min,90min后ERK1/2蛋白產(chǎn)物及磷酸化ERK1/2蛋白產(chǎn)物的表達(dá);用細(xì)胞免疫熒光化學(xué)法檢測各組細(xì)胞干預(yù)30min,60min,90min后磷酸化ERK1/2蛋白產(chǎn)物的表達(dá);用MTT酶聯(lián)免疫法檢測各組細(xì)胞干預(yù)24h,48h,72h后的光密度值,計算細(xì)胞的存活率;用Annex

3、inV-FITC/PI雙染流式細(xì)胞術(shù)檢測各組細(xì)胞干預(yù)后24h,48h,72h細(xì)胞的凋亡率;用電子顯微鏡技術(shù)觀察各組細(xì)胞干預(yù)后24h,48h,72h細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的變化。
　　結(jié)果：經(jīng)western-blot檢測,ERK1/2蛋白產(chǎn)物在各組細(xì)胞中表達(dá)差別無統(tǒng)計學(xué)意義,磷酸化ERK1/2在空白對照組、紅光照射組、ALA組細(xì)胞中的表達(dá)無明顯差別,在ALA-PDT組細(xì)胞中的表達(dá)明顯高于其余各組,在ERK阻斷劑組細(xì)胞中的表達(dá)明顯低于其余各組;

4、細(xì)胞免疫熒光化學(xué)檢測的結(jié)果和western-blot一致;MTT檢測結(jié)果表明,空白對照組、ALA組及紅光照射組之間相比細(xì)胞存活率無明顯差別,ALA-PDT組細(xì)胞的存活率與空白對照組、ALA組、紅光照射組之間相比明顯降低,ERK阻斷劑組細(xì)胞的存活率與空白對照組、ALA組、紅光照射組、ALA-PDT組之間相比更加降低;流式細(xì)胞儀檢測結(jié)果表明,空白對照組、ALA組及紅光照射組之間相比細(xì)胞凋亡率無明顯差別,ALA-PDT組細(xì)胞的凋亡率與空白對照

5、組、ALA組、紅光照射組之間相比明顯升高,ERK阻斷劑組細(xì)胞的凋亡率與空白對照組、ALA組、紅光照射組、ALA-PDT組之間相比更加升高;電子顯微鏡檢測結(jié)果表明,空白對照組、ALA組及紅光照射組之間相比較細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)變化無差別,ALA-PDT組與其余各組相比細(xì)胞損傷明顯,ERK阻斷劑組與其它各組相比細(xì)胞損傷更明顯。
　　結(jié)論：阻斷ERK通路可以降低SCL-1細(xì)胞內(nèi)p-ERK1/2的表達(dá);增強(qiáng)ALA-PDT對SCL-1細(xì)胞的殺傷作用