特異性識(shí)別Cp的ATF在體外抑制HBV的實(shí)驗(yàn)研究.pdf_第1頁(yè)
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1、目的：設(shè)計(jì)可特異性識(shí)別并結(jié)合于HBV核心啟動(dòng)子(Cp)的人工轉(zhuǎn)錄因子(ATF)，并觀察其對(duì)HBV表達(dá)的抑制作用。
　　方法：(1)分析及比對(duì)HBV Cp序列后確定最佳靶序列，再設(shè)計(jì)可識(shí)別該靶序列的鋅指蛋白(ZFP)氨基酸序列;(2)逆向翻譯ZFP氨基酸序列獲得核苷酸序列，優(yōu)化并添加核定位信號(hào)和KRAB抑制域等后獲得完整ATF核苷酸序列，構(gòu)建重組質(zhì)粒pcDNA3.1(+)-ATF;(3)pcDNA3.1(+)-ATF轉(zhuǎn)染真核細(xì)胞CO

2、S-7，RT-PCR和Western blot分別觀察ATF mRNA及蛋白能否正常表達(dá);(4) pcDNA3.1(+)-ATF轉(zhuǎn)染HepG2.2.15細(xì)胞，qPCR、RT-PCR和ELISA分別檢測(cè)HBV DNA、mRNA和HBeAg及HBsAg含量。
　　結(jié)果：(1)實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組相比，ATF mRNA和蛋白在COS-7細(xì)胞中表達(dá)正常;(2)轉(zhuǎn)染HepG2.2.15細(xì)胞后，與對(duì)照組相比，實(shí)驗(yàn)組HBV DNA、mRNA和HBeA

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