1、近年來(lái)，自身免疫性肝炎(autoimmune hepatitis, AIH)發(fā)病率日趨升高。AIH屬于自身免疫性肝病(autoimmune liver diseases, AILD)，是由自身免疫反應(yīng)介導(dǎo)的嚴(yán)重的進(jìn)行性疾病，許多患者可迅速進(jìn)展為肝硬化和肝衰竭。對(duì) AIH作出快速而準(zhǔn)確的診斷和治療是阻止病程進(jìn)展的關(guān)鍵因素。然而，由于該病發(fā)病機(jī)制未明，臨床表現(xiàn)不典型及伴發(fā)重疊綜合征等，目前AIH的診斷方法還存在過(guò)程繁雜、周期長(zhǎng)、敏感性和特異

2、性低等局限，因此探索建立 AIH診斷新方法具有重要的臨床應(yīng)用價(jià)值。
　　為此，本課題利用臨床病例標(biāo)本，采用代謝組學(xué)方法，通過(guò)1H NMR和LC-MS/MS Q-TOF檢測(cè)，篩查AIH的診斷生物標(biāo)志物；納入臨床常見(jiàn)、易混淆疾病原發(fā)性膽汁性肝硬化(primary biliary cirrhosis, PBC)、重疊綜合征(overlap syndromes OS)和藥物性肝損傷(drug-induced liver injury, D

3、ILI)，對(duì)比考察所選標(biāo)志物在 AIH診斷中的敏感性和特異性；通過(guò)中西醫(yī)干預(yù)研究，考察標(biāo)志物對(duì)預(yù)后的預(yù)示能力。主要研究?jī)?nèi)容和結(jié)論如下：
　　1．建立了大樣本AILD醫(yī)學(xué)數(shù)據(jù)庫(kù)（1866例），初步分析了三種自身免疫性肝病的主要臨床特征。
　　系統(tǒng)整理了解放軍302醫(yī)院2005-2010年AILD病歷資料，建立了大樣本的醫(yī)學(xué)數(shù)據(jù)庫(kù)，共收錄1866例AILD患者信息，其中AIH676例、PBC912例、OS278例。AIH在200

4、5-2010年住院人數(shù)比例從0.65％上升至0.96%，呈逐年升高趨勢(shì)；三種自身免疫性肝病的臨床癥狀/體征缺乏特異性，臨床特征相似，主要表現(xiàn)為乏力、納差、面色晦暗、黃疸、肝掌、肝功異常等，且患者做肝穿病理檢查的比例較少，給臨床診斷帶來(lái)一定的困難。
　　數(shù)據(jù)庫(kù)的建立為各類AILD的流行病學(xué)研究提供數(shù)據(jù)支持。該數(shù)據(jù)的建立有利于AILD的中醫(yī)證侯學(xué)研究，方便了臨床和科研工作的開(kāi)展。
　　2.建立了基于血漿1H NMR代謝組學(xué)的AI

5、H診斷模型。
　　本文采用LC-MS/MS Q-TOF和1H NMR技術(shù)，以AIH、PBC及健康人群血漿、尿液樣本為研究對(duì)象，對(duì)血漿、尿液中小分子代謝物質(zhì)進(jìn)行檢測(cè)分析。結(jié)果顯示：基于 LC- MS/MS Q-TOF技術(shù)建立的血漿樣本診斷模型的質(zhì)量參數(shù)， R2Y=96.9%，Q2(cum)=71.9%，診斷模型可以較好地解釋組間差異，但預(yù)測(cè)可信度較低；基于1H NMR技術(shù)建立的尿液樣本診斷模型的質(zhì)量參數(shù)R2Y=56.6%， Q2(c

6、um)=9.6%，診斷模型不能很好地解釋組間差異，并且預(yù)測(cè)可信度較低；基于1H NMR技術(shù)建立的血漿樣本診斷模型的質(zhì)量參數(shù)R2Y=99.4%，Q2(cum)=97.7%，診斷模型能很好地解釋組間差異，并且預(yù)測(cè)可信度高。
　　通過(guò)對(duì)上述診斷模型進(jìn)行評(píng)價(jià)和比較，基于血漿的1H NMR代謝組學(xué)技術(shù)在AIH診斷中有潛在的優(yōu)勢(shì)。
　　3.篩選獲得了敏感性和特異性均較高的10個(gè)AIH診斷生物標(biāo)志物。
　　在已建立的基于血漿的1H

7、NMR代謝組學(xué)的AHI診斷方法基礎(chǔ)上，通過(guò)擴(kuò)大樣本量（65例），采用1802個(gè)化學(xué)位移進(jìn)行建模分析，結(jié)果顯示：模型質(zhì)量參數(shù)R2Y=97.4%，Q2(cum)=85.6%，診斷模型仍能很好地解釋組間差異，并且預(yù)測(cè)可信度高。
　　考慮到臨床實(shí)際操作性不強(qiáng)，采用多標(biāo)準(zhǔn)評(píng)價(jià)方法(multi-criteria assessment, MCA)，首先從1802個(gè)化學(xué)位移中找出AIH與PBC組間區(qū)分貢獻(xiàn)較大的256個(gè)化學(xué)位移，然后再經(jīng)過(guò)不斷剔除

8、剩余變量，最終初步鎖定61個(gè)化學(xué)位移，并采用61個(gè)化學(xué)位移建立診斷模型，模型質(zhì)量參數(shù) R2Y=84.7%，Q2(cum)=80.4%，模型擬合良好。進(jìn)一步指認(rèn)了61個(gè)化學(xué)位移對(duì)應(yīng)的10個(gè)標(biāo)志物，它們分別是檸檬酸、谷酰胺、乙酰乙酸、丙酮酸、β-羥異丁酸、組氨酸、谷氨酸、肌酸酐、二甲胺和丙酮。當(dāng)繼續(xù)剔除任意1個(gè)標(biāo)志物后，所建立的診斷模型質(zhì)量參數(shù) R2Y和Q2(cum)均顯著下降，達(dá)不到有效診斷的要求。
　　4.考察了所選10個(gè)標(biāo)志物在

9、臨床診斷中的實(shí)際應(yīng)用。
　　本部分實(shí)驗(yàn)擴(kuò)大疾病種類考察所選10個(gè)標(biāo)志物在臨床AIH診斷中的應(yīng)用，結(jié)果顯示：在AIH與PBC、OS、藥物性肝損傷(drug-induced liver injury，DILI)的診斷中，診斷模型的敏感性為90.5%，特異性為98.3%，準(zhǔn)確率為96.2%；模型在診斷AIH和DILI時(shí)敏感性為95.0%，特異性為100%，準(zhǔn)確率為97.4%；模型在診斷AIH和PBC時(shí)敏感性和特異性均為100%，準(zhǔn)確率為

10、100%；模型在診斷AIH和OS時(shí)敏感性為100%，特異性均為95.0%，準(zhǔn)確率為97.3%。驗(yàn)證了所選標(biāo)志物在 AIH的診斷中重現(xiàn)性較好，而且在疾病診斷時(shí)，具有較高的敏感性和特異性。
　　4.通過(guò)考察中藥愈肝方顆粒聯(lián)用免疫抑制劑（潑尼松）對(duì)所選生物標(biāo)志物的干預(yù)效應(yīng)，驗(yàn)證了所選AIH臨床診斷生物標(biāo)志物能較好地預(yù)示病情的預(yù)后能力。
　　針對(duì) AIH診斷血清抗體缺乏特異性、不能預(yù)示疾病預(yù)后的問(wèn)題，本研究選擇臨床用于AIH治療的愈

11、肝方顆粒（302醫(yī)院院內(nèi)制劑）和潑尼松為干預(yù)藥物，通過(guò)臨床研究驗(yàn)證所選生物標(biāo)志物在中西醫(yī)治療中的變化趨勢(shì)，結(jié)果顯示：從治療前后代謝物的含量變化和AIH患者代謝模式隨時(shí)間變化的PCA軌跡圖觀察，顯示了所選生物標(biāo)志物能較好地預(yù)示病情的預(yù)后；與單用潑尼松相比，愈肝顆粒聯(lián)用潑尼松對(duì) AIH有更好的治療效果，尤其在降低轉(zhuǎn)氨酶、改善癥狀和提高生活治療方面作用突出。
　　綜上，本研究首次建立了一種基于1H NMR檢測(cè)的AIH診斷新方法，在嚴(yán)格控