1、慢性乙型病毒性肝炎(chronichepatitisB，CHB)的發(fā)病機制一直是傳染病領域研究的重點和難點問題。迄今，乙型肝炎病毒(hepatitisBvirus，HBV)感染慢性化以及其持續(xù)感染的機制尚未闡明。自20世紀90年代中期以來，慢性乙型肝炎的抗病毒治療雖然取得了長足的進步，但是現有的抗病毒藥物和治療方案仍然無法從大多數慢性HBV感染者體內徹底清除乙肝病毒。毫無疑問，闡明HBV感染慢性化及持續(xù)感染的發(fā)生機制對于最終治愈慢性乙型

2、肝炎尤為重要。雖然已零星報道應用抗病毒治療藥物后部分慢性乙型肝炎患者的抗病毒免疫力有所提高，但是目前系統(tǒng)的研究報道甚少，且具體機制不明。本研究主要完成了以下兩方面的工作：
　　一、CHB患者外周血Tregs細胞、CD4+T細胞表面PD-1和BTLA的表達和意義
　　為了觀察慢性乙型肝炎(chronichepatitisB，CHB)患者外周血CD4+CD25high調節(jié)性T細胞（regulatoryTcells，Treg）的變

3、化及CD4+T細胞表面PD-1（programmedcelldeath1,CD279）和BTLA（BandTlymphocyteattenuator）的表達情況以及其與臨床指標的相關性。我們采用密度梯度離心法分離39例CHB患者和19例健康對照者的外周血單個核細胞(PBMC)，流式細胞術檢測CD4+CD25highTreg細胞亞群占CD4+T淋巴細胞的比例及CD4+T淋巴細胞表面的抑制性分子PD-1和BTLA的表達，并通過反轉錄PCR法

4、檢測外周PBMC中BTLAmRNA的表達情況。
　　結果①CHB組CD4+CD25highTreg占CD4+T細胞的百分比為7.38±2.02％，明顯高于正常對照組4.99±1.15％（P<0.0001）。HBVDNA定量>108copies/mL的患者CD4+CD25highTreg占CD4+T淋巴細胞的百分比(7.75±2.18％)，顯著高于HBVDNA定量<108copies/mL的患者(6.55±2.34％，P<0.05)

5、。
　　②CD4+PD-1+占CD4+T淋巴細胞的百分比：CHB患者(58.73±11.11％)與正常對照組(47.75±12.69％)比較具有明顯差異（P=0.0013）,HBVDNA定量>108copies/mL的患者中CD4+PD-1+占CD4+T淋巴細胞的百分比（61.18±12.02％）與HBVDNA定量小于108copies/mL的患者（54.36±7.88％）相比無明顯差異（P=0.0552），但HBVDNA定量>1

6、08copies/mL的患者中CD4+PD-1+占CD4+T淋巴細胞的百分比在數值上高于HBVDNA定量小于108copies/mL的患者。
　?、跜D4+BTLA+占CD4+T淋巴細胞的百分比：CHB患者(2.79±0.29％)與正常對照組(2.386±0.4810％)比較無明顯統(tǒng)計學差異（P=0.085）。在外周血單個核細胞中的BTLA-mRNA的表達在慢性乙型肝炎組為1.097±0.0634，而在正常對照中為1.010±0.

7、1449，兩者間無統(tǒng)計學差異（P=0.916）。
　?、蹸D4+CD25highPD-1+T細胞在慢性乙型肝炎患者中(97.78±5.65％)與正常對照(99.11±1.133％)比較無統(tǒng)計學差異（P=0.37），CD4+CD25highBTLA+T細胞在慢性乙型肝炎患者中(9.811±6.013％)與正常對照(13.97±10.84％)比較無統(tǒng)計學差異（P=0.11）。
　　⑤CHB患者CD4+CD25highTreg細胞

8、與HBVDNA載量正相關（r=0.3314，P=0.0393），CD4+T淋巴細胞表面的負性調節(jié)分子PD-1也與HBVDNA載量正相關（r=0.3712，P=0.02）。
　　結論CD4+CD25highTreg細胞在CD4+T淋巴細胞中的比例及CD4+T淋巴細胞表面抑制性分子PD-1的升高可能抑制CHB患者的細胞免疫反應，影響病毒的清除，導致HBV感染慢性化。
　　二抗HBV治療過程CHB患者外周Treg細胞、CD4+T細

9、胞表面PD-1/PD-L1的表達及單核細胞表面TLR2/TLR4的表達及意義
　　在前述研究的基礎上，對28例接受替比夫定抗HBV治療的慢性乙型肝炎患者不同治療時間點外周血Tregs細胞的變化、CD4+細胞表面PD-1/PD-L1的表達和單核細胞表面TLR2/TLR4的表達進行了檢測和分析，以期探討抗病毒治療對慢性乙型肝炎患者免疫功能的影響。采用密度梯度離心法分離28例患者在基線、治療后3個月和6個月的外周血獲取PBMC，使用流式

10、細胞術檢測不同時期外周Treg細胞的頻率、CD4+T表面PD-1和PD-L1的表達,單核細胞表面TLR2和TLR4的表達；ELISA試劑盒檢測血漿中細胞因子IFN-γ、IL-9的濃度。T
　　結果①CHB患者抗病毒治療過程中，在基線、治療3月和6月HBVDN值取對數后的的結果分別為：7.672±0.3055、3.688±0.2711和2.628±0.3176，組間比較具有統(tǒng)計學差異(P<0.001，P<0.001)；丙氨酸氨基轉移

11、酶結果分別為：111.7±9.206u/L、68.19±12.38u/L和30.38±3.273u/L，組間比較具有統(tǒng)計學差異(P<0.001，P<0.001)。
　?、贑HB患者外周血中CD4+CD25highTreg細胞在基線（10.48±0.4809％）和治療后3個月（7.290±0.4258％）、治療后6個月（7.078±0.4274％）比較有明顯統(tǒng)計學差異（P<0.001，P<0.0001），治療3個月和6個月間無統(tǒng)計學

12、差異；在基線、3個月和6個月CD4+CD25+Treg細胞占CD4+T細胞百分比分別為：27.95±1.553％、24.03±1.497％、25.69±1.437％，CD4+CD25+Treg細胞亞群的比例在基線和治療后3個月兩者有統(tǒng)計學差異（P=0.0238），其余比較無差異。
　?、墼诨€、治療后3個月和治療后6個月的CD4+PD-1+T細胞占CD4+T細胞的百分比分別為：42.52±3.386％、33.19±3.352％和4

13、0.08±3.931％，分析發(fā)現治療后3個月較基線明顯減低（P=0.0118），余組間無統(tǒng)計學差異；CD4+PD-L1+T細胞亞群的百分比在基線、治療后3個月和6個月分別為：0.9258±0.2213％、0.4827±0.0909％、0.5258±0.0913％，各組間比較無統(tǒng)計學差異（P=0.0747、P=0.0631），但治療后較基線在數值上較低較明顯。
　?、蹸HB患者在基線、治療后3個月和6個月TLR2的平均免疫熒光強度（

14、meanfluorescenceintensity，MFI）分別為：89.07±6.089、96.12±8.803和102.9±6.633，經統(tǒng)計學分析后發(fā)現治療后6個月較基線明顯增加（P=0.0399），余組間無統(tǒng)計學差異；TLR4的MFI分別為：41.17±2.397、38.20±2.125、40.48±2.371，經統(tǒng)計學分析后發(fā)現各組間無顯著差異（P>0.05）。
　?、萁洐z測20例CHB患者血清中的IFN-γ在基線、治療

15、3個月和6個月的血漿濃度分別為：24.49±3.862pg/ml、21.86±2.873pg/ml、27.28±6.581pg/ml，各組間比較無明顯統(tǒng)計學差異（P>0.05），但治療后6個月血中IFN-γ的濃度值較基線和3個月升高；血漿中的IL-9濃度分別為：30.89±5.279pg/ml、25.80±4.159pg/ml、12.76±2.524pg/ml，治療后3個月、6個月較基線明顯下降（P=0.010、P=0.0086）。