1、目的：建立穩(wěn)定的熱暴露大鼠模型，觀察多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶-1(PARP-1)抑制劑(pj34)是否影響熱暴露大鼠腸上皮緊密連接屏障通透性，并通過(guò)觀察腸上皮細(xì)胞緊密連接蛋白表達(dá)的變化，初步探討pj34對(duì)腸上皮屏障通透性影響的機(jī)制。
　　 方法：將麻醉SD大鼠放置在環(huán)境溫度恒定(42℃)通風(fēng)的恒溫箱中，利用溫度計(jì)每10min測(cè)量一次肛溫，建立穩(wěn)定的熱暴露模型，熱暴露程度將24h死亡率控制在10-20％左右。先期預(yù)實(shí)驗(yàn)觀察熱暴露結(jié)

2、束后0h，2h，6h，8h，12h，24h大鼠腸道上皮細(xì)胞屏障通透性及緊密連接蛋白o(hù)ccludin表達(dá)變化，選取變化最顯著的熱暴露結(jié)束后2h為最佳干預(yù)效果觀察點(diǎn)。干預(yù)試驗(yàn)時(shí)，將SD大鼠隨機(jī)分為三組(n≥6)：熱暴露前1小時(shí)給予pj34的熱暴露組(Intervention組，I組)與安慰劑(生理鹽水)對(duì)照的熱暴露組(Vehicle組，V組)及常溫對(duì)照組(Normal組，N組)，給予熱暴露。觀察熱暴露結(jié)束2小時(shí)后，pj34對(duì)大鼠腸上皮細(xì)胞屏

3、障通透性的影響(血漿中熒光劑FD4、內(nèi)毒素及炎性細(xì)胞因子濃度變化)，并通過(guò)光鏡(HE染色)及透射電鏡觀察小腸組織的大體及微觀形態(tài)學(xué)改變。應(yīng)用蛋白印跡雜交(Western blot)技術(shù)，檢測(cè)熱暴露結(jié)束2小時(shí)后，各組腸上皮細(xì)胞緊密連接蛋白o(hù)ccludin表達(dá)的變化情況。并應(yīng)用免疫熒光、免疫組化檢測(cè)occludin蛋白表達(dá)的形態(tài)學(xué)變化情況。
　　 結(jié)果：預(yù)實(shí)驗(yàn)中，將大鼠麻醉后放入42℃恒溫箱，核心體溫上升速度約0.5℃/5min，熱

4、暴露50min的大鼠24h死亡率在16％，50min時(shí)肛溫可達(dá)42℃左右。在6個(gè)觀察時(shí)間點(diǎn)中，熱暴露結(jié)束后2h內(nèi)毒素水平最高(P<0.05)，緊密連接蛋白Occludin表達(dá)最低，因此該時(shí)間點(diǎn)熱暴露的損傷作用達(dá)到最強(qiáng)，并選為干預(yù)效果觀察點(diǎn)。干預(yù)試驗(yàn)中，熱暴露結(jié)束后2h，給予生理鹽水的熱暴露大鼠小腸上皮細(xì)胞屏障通透性(FD4、內(nèi)毒素及細(xì)胞因子水平)顯著高于正常對(duì)照組(p<0.05)，而pj34干預(yù)組的血漿熒光劑FD4濃度顯著低于安慰劑熱暴

5、露組(P<0.05)，兩組間內(nèi)毒素及炎性因子水平也具有顯著差異(P<0.05)。形態(tài)學(xué)方面，光鏡觀察空腸HE染色，與正常大鼠比較，安慰劑組及干預(yù)組均出現(xiàn)腸上皮細(xì)胞從微絨毛頂端滑塌，從多個(gè)鏡下視野觀察(≥6個(gè)視野/片)，此種表現(xiàn)不具有普遍性，但干預(yù)組上皮細(xì)胞脫落程度明顯減輕。透射電鏡下，正常大鼠腸上皮細(xì)胞，緊密連接結(jié)構(gòu)完整，呈致密的帶狀結(jié)構(gòu)。熱暴露結(jié)束2h后，安慰劑組緊密連接斷裂，細(xì)胞間隙增寬，致密度減輕。干預(yù)組緊密連接帶狀結(jié)構(gòu)完整，致密