1、腎細(xì)胞癌（renal cell carcinoma，RCC）簡(jiǎn)稱腎癌，是起源于腎小管上皮的惡性腫瘤，占腎臟惡性腫瘤的80％-90%。腎癌約占成人惡性腫瘤的2%-3%，世界各國(guó)各地區(qū)腎癌的發(fā)病率差異明顯，發(fā)達(dá)國(guó)家發(fā)病率高于發(fā)展中國(guó)家,我國(guó)各地區(qū)腎癌的發(fā)病率及死亡率差異也較大。腎癌的病因未明。其發(fā)病與遺傳，吸煙，肥胖，高血壓等危險(xiǎn)因素相關(guān)，遺傳性腎癌或家族性腎癌占腎癌總數(shù)的2%-4%。染色體3p25-26的VHL基因與腎透明細(xì)胞癌的發(fā)生有密

2、切關(guān)系。目前，腎癌的治療主要是手術(shù)，放化療，免疫治療和靶向治療，但是這些方法對(duì)于某些晚期和轉(zhuǎn)移性腎癌患者收效甚微。因此，我們急需要發(fā)現(xiàn)新的治療和診斷腎透明細(xì)胞癌的靶點(diǎn)，以達(dá)到早發(fā)現(xiàn)早治療的目的，從而延長(zhǎng)患者的生存時(shí)限并且提高患者的生存質(zhì)量。
　　HIF-1α是低氧誘導(dǎo)因子HIF（hypoxia inducible factor）家族的一員，是由編碼紅細(xì)胞生成素的基因發(fā)現(xiàn)低氧調(diào)控區(qū)域 HRE而得來(lái)的。HIF-1α在低氧條件下與HIF

3、-1β結(jié)合形成異源二聚體并且轉(zhuǎn)移進(jìn)入細(xì)胞核，從而調(diào)控下游靶基因表達(dá)。研究證實(shí)HIF-1α可促進(jìn)多種腫瘤細(xì)胞增殖，轉(zhuǎn)移和血管生成。HIF是腎透明細(xì)胞癌中VHL信號(hào)通路的重要組成部分，其中HIF-1α過(guò)表達(dá)誘導(dǎo)的血管生成時(shí)腎透明細(xì)胞癌發(fā)生機(jī)制的重要環(huán)節(jié)并且導(dǎo)致較差的臨床治療效果。
　　RNA結(jié)合蛋白QKI是信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和激活家族（STAR家族）成員之一。qki基因可以編碼多種蛋白，主要有三種亞型QKI-5、QKI-6和QKI-7。以往的研

4、究表明QKI在神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育中發(fā)揮重要作用。我們實(shí)驗(yàn)室的研究也表明，QKI促進(jìn)了結(jié)腸上皮，巨噬細(xì)胞和肌肉細(xì)胞的分化過(guò)程。同時(shí)QKI在胃癌，前列腺癌和舌癌中還扮演著抑癌基因的角色。基于以上研究，本課題意在探討QKI在腎癌發(fā)生發(fā)展中的作用，能否作為診斷，治療和預(yù)后的潛在靶點(diǎn)。
　　目的：
　　1)利用腎透明細(xì)胞癌以及匹配的癌旁臨床組織樣本，檢測(cè)RNA結(jié)合蛋白QKI的表達(dá)量是否存在差異，同時(shí)在腫瘤細(xì)胞系和正常細(xì)胞中檢測(cè)QKI表達(dá)是否

5、存在差異。
　　2)觀察過(guò)表達(dá)和干涉QKI對(duì)腫瘤細(xì)胞增殖凋亡以及周期的影響
　　3)在上述功能變化的基礎(chǔ)上，進(jìn)一步探索RNA結(jié)合蛋白QKI發(fā)揮上述作用的分子機(jī)制。
　　4)最后通過(guò)組織芯片技術(shù)收集腎透明細(xì)胞癌組織并進(jìn)行免疫組化半定量和統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，探討RNA結(jié)合蛋白QKI與患者的分級(jí)分期以及生存時(shí)間是否存在相關(guān)性。
　　方法和結(jié)果：
　　1)針對(duì)腎癌臨床樣本的免疫組織化學(xué)染色結(jié)果表明，QKI在腎透明細(xì)胞癌中的

6、表達(dá)量低于癌旁組織；并且QKI的表達(dá)水平與腎癌的惡性程度呈負(fù)相關(guān)：對(duì)腫瘤組織以及癌旁組織進(jìn)行Western Blot檢測(cè)結(jié)果顯示，腎癌患者的癌旁組織中QKI的表達(dá)水平明顯高于腫瘤組織。同時(shí)，我們通過(guò)RT-PCR和Western Blot在細(xì)胞水平檢測(cè)QKI的表達(dá)，結(jié)果顯示QKI的表達(dá)趨勢(shì)與組織水平相一致。
　　2)MTT結(jié)果顯示，過(guò)表達(dá)QKI使786-0和Caki-1細(xì)胞增殖受到抑制；流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果顯示，過(guò)表達(dá)QKI使786-0和

7、Caki-1細(xì)胞凋亡率增加。RT-PCR和Westernblot結(jié)果顯示過(guò)表達(dá)QKI使周期相關(guān)蛋白cyclinD1表達(dá)降低，而p27表達(dá)增高；流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果顯示，過(guò)表達(dá)QKI后786-0和Caki-1腫瘤細(xì)胞中S期細(xì)胞比例降低。同時(shí)，干涉QKI后與過(guò)表達(dá)結(jié)果相反。
　　3)RT-PCR和Western Blot結(jié)果顯示，在低氧（5%）和常氧（20%）條件下，過(guò)表達(dá)QKI使低氧誘導(dǎo)因子HIF-1α表達(dá)均受到抑制; RT-PCR結(jié)果顯

8、示，在同樣的條件下，HIF-1α下游靶基因GLUT-1，VEGF，PGK-1表達(dá)同樣受到抑制；同時(shí)，在干涉QKI后得到與過(guò)表達(dá)結(jié)果相反。RT-PCR結(jié)果顯示，在過(guò)表達(dá)QKI的同時(shí)使用si-RNA-HIF-1α干涉掉HIF-1α后，其下游靶基因變化趨勢(shì)不再明顯。
　　4)對(duì)腎癌臨床樣本進(jìn)行免疫組化染色，并對(duì)染色結(jié)果進(jìn)行半定量分析，以25%陽(yáng)性率為界值點(diǎn)，將QKI表達(dá)分為低表達(dá)（≤25%）和高表達(dá)（>25%）。通過(guò)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，QKI高

9、表達(dá)與腫瘤分級(jí)呈負(fù)相關(guān)，而與分期無(wú)明顯相關(guān)性，QKI高表達(dá)的患者生存率明顯高于QKI低表達(dá)患者。
　　結(jié)論：
　　通過(guò)實(shí)驗(yàn)研究，我們首次發(fā)現(xiàn)了RNA結(jié)合蛋白QKI在腎透明細(xì)胞癌中發(fā)揮著抑癌的作用。我們發(fā)現(xiàn)QKI在臨床腎癌腫瘤組織中表達(dá)下調(diào)，并且QKI的表達(dá)水平與腫瘤的分級(jí)呈負(fù)相關(guān)，與患者的生存期呈正相關(guān)；細(xì)胞實(shí)驗(yàn)表明，過(guò)表達(dá)QKI能夠抑制腎癌細(xì)胞的增殖，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的凋亡以及抑制腫瘤細(xì)胞周期；同時(shí)，過(guò)表達(dá)QKI能夠抑制低氧誘