1、背景和目的：艾滋病(AIDS)是因感染人類免疫缺陷病毒(HIV)引起的嚴重傳染病，自1981年首次被發(fā)現(xiàn)以來，以難以遏制的速度在全球持續(xù)蔓延。目前，雖有預防性疫苗的研發(fā)進入臨床試驗階段，但由于(HIV)的高度遺傳變異性，其前景尚不樂觀。因此方便、快速、高效的HIV診斷技術是控制艾滋病流行的重要手段。實驗室檢測HIV感染的方法很多，根據(jù)衛(wèi)生部2004年頒布的《全國艾滋病檢測技術規(guī)范》，HIV抗體檢測作為篩查HIV病毒攜帶者的主要檢測手段。

2、檢測分為初篩、復檢和確證三個步驟，確證試劑通常采用免疫印跡(WB)法。 確證試劑制備的技術難度高，質(zhì)量要求嚴格，國內(nèi)外僅有少數(shù)企業(yè)生產(chǎn)，市場價格比較高。而且WB法本身也存在一些缺陷：如制備工藝存在生物安全性問題；用于臨床檢測時非特異性反應多、背景高；對檢測人員的技術要求比較高。 條帶免疫印跡(LIA)法是WB法的一種改進方法。其原理是用基因工程重組蛋白或合成多肽替代WB法所用的病原體提取物，作為診斷試劑的抗原，經(jīng)蛋白噴點

3、三維平臺包被于固相載體上。通過調(diào)配各抗原組分上樣濃度，可以提高各組分對抗體的檢測能力。本課題改良這種技術用于確證HIV感染，并以國內(nèi)目前最常用的HIVWB法抗體確證試劑作為參比試劑，從試劑檢測水平(靈敏度、特異度、窗口期、檢測限等)、可操作性、生產(chǎn)成本等方面進行綜合評價。 材料與方法：制備LIA法試劑所用的抗原由浙江澳亞生物工程研究院構建表達，包括HIV中國流行株特異性重組抗原gp41、gP120、p17、p24、p55、p31

4、、HIV-2gp36等。固相載體選擇Pall公司生產(chǎn)的硝酸纖維素膜。參比試劑選用杭州澳亞生物技術有限公司生產(chǎn)的人類免疫缺陷病毒抗體確證試劑盒(WB法)。評價樣本分別為HIV抗體確證試劑國家參考血清、BBI公司HIV抗體陽轉血清盤、公司自制HIV抗體檢測限質(zhì)控血清盤。臨床評價樣本由中國性病艾滋病預防控制中心國家參比實驗室等4家單位采集。 初步建立LIA法確證試劑的制備方法和檢測方法，檢測上述樣本，統(tǒng)計檢測結果，計算試劑的靈敏度、特

5、異性等評價數(shù)據(jù)。通過生產(chǎn)工藝設計、成本核算，評價LIA法試劑盒批量生產(chǎn)的可行性；通過訪問試驗人員，了解其對LIA法用于臨床檢驗的認可度，主要包括操作是否較WB法方便、結果是否較WB法易判等。 結果：檢測27份國家參考血清，結果12份陰性參考品均為陰性反應，10份HIV陽性參考品均為陽性反應，5份不確定參考品結果無陰性反應。用LIA法和WB法分別檢測HIV抗體陽轉血清盤，LIA法在第33天可以檢測到針對gp41的抗體，優(yōu)于WB法。

6、用LIA法和WB法分別檢測HIV抗體檢測限質(zhì)控血清盤，LIA法可判定1：40000稀釋比的血清，優(yōu)于WB法。臨床檢驗結果LIA法確證試劑盒的靈敏度為100％、特異度為98.3％，而WB法檢測的靈敏度為98.8％、特異度為93.9％。gp41和p24在檢測中出現(xiàn)頻次較高，可以作為HIV陽性的主要判斷標準。HBV感染者比其他人群更容易檢測出不確定結果。 結論: 在本次評價中，LIA法各項指標達到或超過WB法水平，而且生產(chǎn)成本更低，操