1、本文探討ic-PCR 法在四種嚴重傳染病病原：霍亂弧菌、大腸埃希氏菌O157、SARS 冠狀病毒和流感病毒檢測中的應用。1. 三種免疫捕捉法：微孔板、200ulPCR 管和免疫磁珠，均可從環(huán)境樣品和人體樣品中特異捕捉霍亂弧菌、大腸埃希氏菌O157、SARS 冠狀病毒和流感病毒，較傳統(tǒng)的分離培養(yǎng)方法可節(jié)省大量時間。免疫磁珠法因可處理的樣品量大，反應動力學特性更佳，是最合適的免疫捕捉方法。2. 細菌的檢測：在O1、O139 群霍亂弧菌的群特

2、異性抗原基因和腸毒素基因上，設計3 對引物進行多重PCR，一次PCR 反應即可檢測出霍亂弧菌，區(qū)分血清群別及是否為流行毒株。PCR 擴增序列與預計序列完全一致，檢測限低于100cfu/ml；根據(jù)大腸埃希氏菌O157的rfb 基因設計的巢式PCR 引物擴增，可特異擴增497bp 片段，序列與S83460 完全一致，檢測限約102cfu/ml，免疫磁珠法略高于200ulPCR 管法。3. SARS 冠狀病毒的檢測：微孔板法捕捉的病毒顆粒，經

3、熱裂解后熒光RT-PCR 檢測SARS 病毒RNA 的保守序列片段，臨床標本檢測未出現(xiàn)假陽性結果，避免了直接提取標本總RNA 進行熒光RT-PCR 檢測時產生假陽性的干擾，檢測限101copies，靈敏度比推薦用的熒光RT-PCR 試劑盒標稱值提高了10 倍，在臨床病人的診斷上具有重要的參考意義。4. 流感病毒的檢測：流感病毒對人類危害最大的主要是A/H1和A/H3 兩型。200ul PCR 管結合RT-PCR 擴增NP 基因，檢測限約