1、目的：探討香煙煙霧提取物(cigarette smoking extract，CSE)對(duì)體外培養(yǎng)的人內(nèi)皮細(xì)胞細(xì)胞色素C氧化酶(cytochrome c oxidase，COX)活性及細(xì)胞凋亡的影響。 方法：體外培養(yǎng)人內(nèi)皮細(xì)胞(ECV304)，取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞用于試驗(yàn)。一支去過(guò)濾嘴燃燒的香煙由負(fù)壓吸引驅(qū)動(dòng)裝置連續(xù)抽吸，吸入煙霧，經(jīng)三通管的一個(gè)出口入無(wú)血清1640培養(yǎng)液中制成懸液，過(guò)濾除菌，用無(wú)血清的1640培養(yǎng)液稀釋成不同濃度，1

2、 h內(nèi)用于實(shí)驗(yàn)。整個(gè)試驗(yàn)分為兩個(gè)部分：1.內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)，按照CSE干預(yù)濃度不同，將試驗(yàn)分為四組：0％CSE組、0.5％CSE組、1％CSE組、5％CSE組。各組細(xì)胞培養(yǎng)12h后，采用MTT法檢測(cè)CSE對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞增殖的影響，流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡的情況，生物化學(xué)的方法檢測(cè)COX活性的改變。2.用5％CSE分別干預(yù)內(nèi)皮細(xì)胞0小時(shí)、6小時(shí)、12小時(shí)、24小時(shí)后，采用MTT法檢測(cè)細(xì)胞增殖的情況，流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡的情況，生物化學(xué)法檢測(cè)COX

3、活性的變化。投射電子顯微鏡觀察5％CSE干預(yù)24小時(shí)組和非CSE干預(yù)組內(nèi)皮細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)。數(shù)據(jù)以-x±s表示，SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件分析，采用Bartlett法行方差齊性檢驗(yàn)，多組間均數(shù)比較采用One-WayANOVA分析，兩兩比較采用LST-t驗(yàn)，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)果：(1)COX活性的檢測(cè)：①不同濃度CSE分別干預(yù)12h：0％CSE組、0.5％CSE組、1％CSE組、5％CSE組CO

4、X活性依次為(0.689±0.028)U/mg、(0.606±0.027)U/mg、(0.547±0.016)U/mg、(0.411±0.017)U/mg，隨著CSE濃度的增高，COX活性逐漸降低，各組之間比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均<0.05)，且5％CSE組COX活性降低最明顯。②5％CSE分別干預(yù)不同時(shí)間：0h組、6h組、12h組、24h組COX活性依次為(0.764±0.030)U/mg、(0.598±0.029)U/mg、(0.4

5、30±0.035)U/mg、(0.324±0.051)U/mg，隨著干預(yù)時(shí)間的延長(zhǎng)，COX活性逐漸降低(P均<0.01)，24h組COX活性下降最明顯。(2)MTT結(jié)果：①不同濃度CSE分別干預(yù)12h：0％CSE組、0.5％CSE組、1％CSE組、5％CSE組OD值依次為(1.047±0.033)、(0.997±0.010)、(0.823±0.005)、(0.764±0.007)，隨著CSE濃度的增高，OD值逐漸下降(P均<0.01)，

6、以5％CSE組下降最明顯。@5％CSE分別干預(yù)不同時(shí)間：0h組、6h組、12h組、24h組0D值依次為(0.956±0.029)、(0.883±0.050)、(0.753±0.015)、(0.624±0.011)，0h組與6h組比較OD值有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)，其余各組間比較則有明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.01)。(3)流式細(xì)胞儀檢測(cè)結(jié)果：①不同濃度CSE分別刺激12小時(shí)：0％CSE組、0.5％CSE組、1％CSE組、5％CSE組凋亡

7、率分別為(1.61±0.24)％、(2.01±0.36)％、(2.31±0.26)％、(5.41±0.39)％，0.5％CSE組與0％CSE組比較其凋亡率無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，余各組間均存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P均<0.05)。②5％CSE分別干預(yù)不同時(shí)間：0h組、6h組、12h組、24h組凋亡率分別為(1.73±0.16)％、(2.86±0.15)％、(5.39±0.57)％、(8.87±0.41)％，各組間比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均<

8、0.05)。(4)投射電鏡觀察發(fā)現(xiàn)CSE干預(yù)組內(nèi)皮細(xì)胞體積縮小，細(xì)胞皺褶不規(guī)則，胞漿和細(xì)胞核濃縮，核膜裂解，核仁消失，染色質(zhì)邊緣化或分割成塊狀，形成凋亡小體。 結(jié)論： (1)香煙煙霧提取物(CSE)可抑制內(nèi)皮細(xì)胞細(xì)胞色素C氧化酶(COX)活性，呈濃度和時(shí)間依賴性。 (2)香煙煙霧提取物(CSE)可誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞凋亡，呈濃度和時(shí)間依賴性。 (3)細(xì)胞色素C氧化酶(COX)活性下降在CSE所致內(nèi)皮細(xì)胞凋亡中可能