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![兩種豬源鏈球菌纖連蛋白體外結(jié)合的特征.pdf_第1頁](https://static.zsdocx.com/FlexPaper/FileRoot/2019-3/1/9/2a1cf6b1-ec68-4645-8e0c-7fc0b17dc253/2a1cf6b1-ec68-4645-8e0c-7fc0b17dc2531.gif)
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文檔簡介
1、 豬鏈球菌是集約化養(yǎng)豬場的重要的病原之一。迄今為止,發(fā)現(xiàn)有35個(gè)血清型。豬鏈球菌2型(SS2)被認(rèn)為是毒力最強(qiáng)的。馬鏈球菌獸疫亞種(SEZ)可感染豬、馬、犬、羊、雞、貓及奶牛,在獸醫(yī)方面具有重要的意義。上述兩種菌均是人獸共患病病原,也是我國豬鏈球菌病的主要病原?! 〖?xì)菌表面的疏水性是細(xì)菌重要的理化特性,與細(xì)菌表面組成物質(zhì)有很大關(guān)系,一定程度上與細(xì)菌的致病性有關(guān)?! ±w連蛋白(fibronectin,F(xiàn)n)是由α和β鏈組成的一種二聚
2、體糖蛋白,相對分子質(zhì)量(Mr)約450kD,由多種類型的細(xì)胞表達(dá)產(chǎn)生,在動(dòng)物體內(nèi)兩種存在方式,一種游離存在于血漿中,一種以纖維狀存在于細(xì)胞外基質(zhì)(ECM);α與β鏈中均含有Ⅰ型、Ⅱ型和Ⅲ型三種重復(fù)序列;整合素、肝素、膠原/明膠和血纖蛋白都與Fn結(jié)合,位置各不相同。細(xì)菌表面的Fn結(jié)合蛋白在Fn上有不同的結(jié)合位置。 業(yè)已證明化膿性鏈球菌黏附宿主細(xì)胞的機(jī)制之一是結(jié)合Fn,進(jìn)而定植和侵襲宿主。細(xì)菌表面的Fn結(jié)合蛋白與ECM的Fn的結(jié)合促進(jìn)上
3、皮細(xì)胞內(nèi)化鏈球菌。細(xì)菌與體液中的游離Fn結(jié)合在細(xì)菌逃避宿主的免疫防御方面也有重要意義?! 〔捎名}析法測定SEZATCC35246株(簡稱ATCC35246)和SS2江蘇分離株HA9801(簡稱HA9801)的表面疏水性,結(jié)果表明二菌均為表面疏水菌;ATCC35246既可結(jié)合固定的Fn,又結(jié)合游離的Fn;而HA9801僅與游離的Fn結(jié)合。 測定OD415結(jié)果表明,細(xì)菌的吸附隨細(xì)菌濃度增加而增加,在108CFU/ml達(dá)飽和;包被Fn濃
4、度在0.0625μg/ml~10μg/ml范圍內(nèi),對細(xì)菌的吸附的影響不顯著;細(xì)菌吸附的最佳pH值為7.4?! 「鶕?jù)已發(fā)表的SS2fbps序列,設(shè)計(jì)并合成一對引物,以HA9801的基因組為模板,采用聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)方法擴(kuò)增fbps,克隆于pMD-T18載體。測定陽性質(zhì)粒插入片段的序列。利用DNAstar軟件,比較所測序列與不同來源的SS2的fbps及FBPS與鏈球菌屬其他種同源蛋白的同源性。 用配體印跡結(jié)合試驗(yàn)表明,表達(dá)的融合
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