1、植物內(nèi)生放線(xiàn)菌作為新的微生物資源具有廣泛的應(yīng)用前景，無(wú)論在控制植物病害的生物防治領(lǐng)域，還是從中尋找新型殺菌劑或藥物先導(dǎo)化合物方面都極具開(kāi)發(fā)價(jià)值。為了提高植物內(nèi)生放線(xiàn)菌的抗菌活性，將本研究室分離保存的2株植物內(nèi)生放線(xiàn)菌SF4、SG2和1株具有較好抗菌活性的生防放線(xiàn)菌SC1作為親本，開(kāi)展雙親和三親本的原生質(zhì)體融合，通過(guò)研究，獲得了綜合親本優(yōu)良性狀的新型高效菌株。 通過(guò)蔗糖質(zhì)量濃度、Gly質(zhì)量濃度、親本菌株對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期、酶的種類(lèi)與濃度、

2、酶解時(shí)間與溫度以及親本菌株滅活條件的確定，以原生質(zhì)體形成率和再生率為指標(biāo)，確定及優(yōu)化了親本菌株的融合條件。 實(shí)驗(yàn)得出，親本菌株SF4和SG2的融合條件為：蔗糖質(zhì)量濃度：SF4為30％，SG2為20％；Gly質(zhì)量濃度：SF4和SG2均為0.5％；對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期：SF4為48～81h，SG2為33～72h；酶的種類(lèi)：溶菌酶；酶的濃度：SF4為15 mg·mL-1，SG2為10 mg·mL-1；酶解溫度：均為35℃；酶解時(shí)間：SF4為90

3、min，SG2為60min；熱滅活溫度：均為55℃；熱滅活時(shí)間：SF4為15min，SG2為10min；紫外線(xiàn)滅活時(shí)間：SF4為4min，SG2為2min。 根據(jù)以上優(yōu)化條件，以2個(gè)親本或3個(gè)親本菌株進(jìn)行原生質(zhì)體融合，獲得了25株融合子。通過(guò)遺傳穩(wěn)定性、菌落形態(tài)特征以及皿內(nèi)抑菌活性測(cè)定進(jìn)行融合子篩選，共獲得6株整體性能穩(wěn)定且有較好抑菌活性的融合菌株。 通過(guò)抗菌機(jī)理、形態(tài)與培養(yǎng)特征、產(chǎn)孢量和菌絲生長(zhǎng)量、生理生化特征、內(nèi)生性

4、以及多胺測(cè)定對(duì)融合菌株進(jìn)行進(jìn)一步的檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)融合菌株與親本菌株既有差別，又有相同之處，說(shuō)明親本原生質(zhì)體融合后形成的融合菌株既保留了親本的某些性狀，而其自身又產(chǎn)生了一些新的性狀。 最后通過(guò)分子生物學(xué)方法對(duì)親本菌株及其融合菌株進(jìn)行檢測(cè)，利用細(xì)菌通用引物對(duì)融合菌株及其親本16S rDNA進(jìn)行擴(kuò)增，均獲得大小約1.5kb的片段，用限制性?xún)?nèi)切酶對(duì)擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行酶切，以親本菌株為對(duì)照，酶切圖譜中既具備與親本相同的一些條帶，也有完全不同于親本的