1、分類號：單位代碼：10364密級：學號：S10071007402安徽農(nóng)業(yè)大學安徽農(nóng)業(yè)大學學位論文強光脅迫下外源硫化氫對石斛抗氧化系統(tǒng)的影響及MSAP分析EffectsofsodiumhydrosulfideonantioxidantsystemMSAPAnalysisofDendrobiumofficinaleunderhighlightstress研究生：關蕾指導教師：林毅教授申請學位門類級別：理學碩士專業(yè)名稱：遺傳學研究方向：分子遺

2、傳學所在學院：生命科學學院I摘要鐵皮石斛，是我國傳統(tǒng)的貴重中藥材，為蘭科多年生附生草本植物。石斛是兼性CAM植物[1]，其生長對生態(tài)環(huán)境要求十分嚴格，對光強變化較為敏感。本試驗以鐵皮石斛為材料，研究強光脅迫下外源H2S對其葉綠素熒光和抗氧化酶活性的影響，探討H2S對兼性CAM植物的生理調(diào)節(jié)功能；并利用甲基化敏感擴增多態(tài)性技術，研究脅迫前后與H2S介導緩解脅迫前后甲基化水平及狀態(tài)的變化，探討鐵皮石斛在強光脅迫下生理相應機制，以及外源H2S

3、調(diào)控鐵皮石斛響應強光、緩解逆境脅迫的分子機理。主要研究結果如下：(1)硫氫化鈉（NaHS，H2S的供體）處理緩解強光脅迫對鐵皮石斛造成的氧化損傷作用有顯著的劑量效應。200μmol?L1的H2S處理可顯著促進SOD、CAT和POD的酶活性，降低MDA含量，緩解強光脅迫對鐵皮石斛造成的氧化損傷作用。高濃度(600μmol?L1)H2S處理則加重了石斛的氧化損傷。(2)200μmol?L1H2S處理可緩解強光下石斛FvFm的下降程度；高濃度

4、(600μmol?L1)H2S處理加劇了FvFm的下降程度，光能轉換系統(tǒng)未能通過有效的光能轉換和非光化學反應耗散過剩的光能從而加劇了PSⅡ反應中心光抑制的發(fā)生。(3)采用66對MSAP引物進行PCR擴增反應，平均共擴增出1193.5個帶型，平均每對引物擴增出18.1個片段。不同濃度H2S的處理總甲基化和全甲基化的比率不同。DNA甲基化的總體水平為28.9%35.4%全甲基化水平為19.9%23.9%。其中200μmol?L1的NaHS處

5、理的石斛DNA甲基化比率為33%，最接近于對照（35.4%）。(4)采用66對引物組合進行MSAP擴增發(fā)現(xiàn)：800μmolm2s1強光下0μmol?L1H2S處理組T1與對照CK相比、200μmol?L1H2S處理組T3和600μmolL1H2S處理組T5與T1相比，石斛基因組DNA去甲基化（B型）位點數(shù)分別為75、93和78，占總甲基化多態(tài)性擴增位點數(shù)的6.4%、7.7%和6.7%。類型C包含了5種甲基化帶型，表明強光脅迫下外源H2S

6、對鐵皮石斛基因組DNA發(fā)生了甲基化水平的增加。T1、T3和T5的石斛基因組DNA甲基化（C型）位點數(shù)分別為106、99和107，占總甲基化多態(tài)性擴增位點數(shù)的9.0%、8.1%和9.2%。H2S處理組T3和T5分別與對照相比，分別有8.1%和8.8%的位點DNA甲基化水平上升。類型D的比例少于總檢測位點的1%。(5)采用66對引物組合共篩選得到200500bp左右的多態(tài)性片段有37條，對其中變化穩(wěn)定的11個片段進行測序，有1條發(fā)生了超甲基