1、隨著胚胎生物工程技術(shù)的深入研究和不斷發(fā)展,在中國開展對鹿胚胎體外生產(chǎn)技術(shù)的研究顯得越來越重要與緊迫.該研究以中國的馬鹿為試驗對象,對鹿胚胎體外生產(chǎn)體系中最關(guān)鍵的基礎(chǔ)性環(huán)節(jié)--鹿卵母細胞的體外成熟和體外受精進行探索,旨在提出一套在實踐中具有可操作性的鹿卵母細胞體外培養(yǎng)體系,進而為鹿體外受精研究奠定基礎(chǔ).試驗研究結(jié)果表明:1、采用遞減法肌肉注射Folltropin-Ⅴ(Canada)并結(jié)合PG對馬鹿進行超數(shù)排卵處理可以有效提高母鹿卵巢卵母細

2、胞的采集數(shù)量.2、采用先抽吸再切割的方法可以提高所獲取鹿COCs的數(shù)量.3、將所獲卵泡液和切割液經(jīng)過沖洗處理后再檢卵與直接檢卵相比:視野明了,蛋白質(zhì)等物質(zhì)不易發(fā)生凝集,卵的移取方便、快速.4、檢取的鹿卵母細胞可分為4級:A級為卵丘細胞致密,不擴散,細胞質(zhì)均勻,形狀規(guī)則,至少完全包裹有4層卵丘細胞;B級為卵丘細胞1~3層,基本上包裹卵母細胞;C級為半裸卵,卵母細胞外有部分卵丘細胞存在;D級為裸卵、變形卵,包括退化的卵母細胞.5、馬鹿的卵母

3、細胞在體外成熟培養(yǎng)中采用37℃和38.5℃兩種溫度條件的比較結(jié)果是:38.5℃條件下的卵母細胞成熟率(78.9﹪)顯著(p<0.05)高于37.0℃時的卵母細胞成熟率(44.4﹪).6、以M199作為馬鹿卵母細胞體外成熟培養(yǎng)的培養(yǎng)基,所配制的成熟液(1):M199+10﹪FBS+0.2mM丙酮酸鈉+1mM雙抗+10mM Hepes+10mg/ml GnRH+1mg/mlE<,2>與成熟液(2):M199+20﹪FBS+0.2MM丙酮酸鈉