1、該實(shí)驗(yàn)對(duì)北山羊異種體細(xì)胞核移植進(jìn)行了研究.先后對(duì)比了山羊卵巢運(yùn)輸溫度,成熟液中的激素比例以及成熟時(shí)間對(duì)山羊卵母細(xì)胞成熟的影響;探討了不同激活方法對(duì)山羊卵母細(xì)胞的孤雌激活的影響;并用北山羊和山羊耳部成纖維細(xì)胞進(jìn)行了建系,及核型分析和生長曲線測(cè)定;測(cè)定了不同生長狀態(tài)的北山羊和山羊成纖維細(xì)胞的細(xì)胞周期;探討了山羊新鮮卵丘細(xì)胞和培養(yǎng)冷凍后解凍的顆粒細(xì)胞作為核供體對(duì)山羊核移植效率的影響,電脈沖參數(shù)對(duì)重構(gòu)胚發(fā)育的影響,以及血清饑餓與完全匯合培養(yǎng)的北

2、山羊和山羊成纖維細(xì)胞對(duì)重構(gòu)胚發(fā)育的影響;并對(duì)異種重構(gòu)胚進(jìn)行了胚胎移植.實(shí)驗(yàn)得出以下結(jié)論:1、山羊卵巢運(yùn)輸溫度以20~35℃為佳;成熟液中以FSH8μg/ml,LH0.6IU/ml成熟率較高;而隨著山羊卵母細(xì)胞成熟時(shí)間延長,其成熟率提高,但去核率下降.2、電激活結(jié)合化學(xué)激活可以更好的激活山羊IVM卵母細(xì)胞;在化學(xué)激活液中添加CB,卵裂率與對(duì)照組相比差異顯著(P<0.05),但囊胚率差異不顯著.3、組織塊培養(yǎng)法對(duì)于原代細(xì)胞的培養(yǎng)要優(yōu)于酶消化

3、法;山羊和北山羊的染色體均為60條,且均為端著絲粒染色體;所建北山羊和山羊成纖維細(xì)胞系開始生長緩慢、后期生長接觸抑制,屬于正常細(xì)胞;北山羊細(xì)胞較山羊細(xì)胞生長慢,群體倍增時(shí)間分別為:4.46d,2.51d.4、新鮮山羊卵丘細(xì)胞重構(gòu)胚的融合率與培養(yǎng)顆粒細(xì)胞組差顯著(p<0.05),但卵裂率及桑囊胚率差異不顯著.顆粒細(xì)胞作為核供體融合率和卵裂率均顯著高于成纖維細(xì)胞,但桑囊胚率差異不顯著.匯合培養(yǎng)與饑餓培養(yǎng)的細(xì)胞作為核供體在融合率、卵裂率、桑囊

4、胚率上差異均不顯著(p>0.05).5、體外培養(yǎng)第9代北山羊成纖維細(xì)胞和第6代山羊成纖維細(xì)胞,生長至50％~60％、70％~85％和完全匯合時(shí)細(xì)胞周期分布存在明顯差異.而血清饑餓和完全匯合處理細(xì)胞,細(xì)胞周期分布無顯著差異,即采用異種克隆北山羊時(shí)可以用生長完全匯合的方法代替血清饑餓處理來得到G0/G1期細(xì)胞.6、核移植325枚異種重構(gòu)胚,融合率為33.2％.70枚卵裂重構(gòu)胚移植于14只受體羊,有兩只妊娠(14.3％),但都于75d時(shí)流產(chǎn).