1、◎潮南鉀軾大苷碩士學(xué)位論文CRISPR／Cas9技術(shù)敲除statlb基因?qū)Π唏R魚(yú)早期骨骼發(fā)育的影響研究學(xué)科專業(yè)壘查堂學(xué)位類型旦盤(pán)堂堂垡旦圭些生焦研究生姓名疊莖墨導(dǎo)師姓名、職稱整塑塞絲撞論文編號(hào)湖南師范大學(xué)學(xué)位評(píng)定委員會(huì)辦公室二零一七年五月中文摘要IJIIIlUIIIIIIIIIIIIIIIIY3233192信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)與轉(zhuǎn)錄激活因子(STATI)在細(xì)胞增殖、細(xì)胞凋亡、細(xì)胞分化以及免疫功能調(diào)節(jié)等生物學(xué)過(guò)程中起著重要的作用。本研究室前期運(yùn)用基因

2、差異表達(dá)譜分析方法對(duì)人類STATI基因進(jìn)行了研究分析，發(fā)現(xiàn)STATI基因和骨質(zhì)疏松之間相關(guān)聯(lián)。斑馬魚(yú)和人類基因有著高達(dá)87％的同源性，本研究以模式生物斑馬魚(yú)為研究對(duì)象，對(duì)statlb基因在斑馬魚(yú)骨骼發(fā)育中的作用進(jìn)行探討。本研究運(yùn)用CRISPR／Cas9基因打靶技術(shù)對(duì)斑馬魚(yú)statlb基因進(jìn)行敲除，并獲得能夠穩(wěn)定遺傳的基因突變型斑馬魚(yú)，建立斑馬魚(yú)statlb廣突變模型。將兩個(gè)靶位點(diǎn)的gRNA和Cas9一mRNA以一定的比例混合后，注射到野

3、生型斑馬魚(yú)一個(gè)細(xì)胞水平的胚胎里進(jìn)行基因編輯。通過(guò)PCR擴(kuò)增、DNA純化回收、T7E1酶切以及Sanger測(cè)序等一系列分子實(shí)驗(yàn)進(jìn)行檢測(cè)，篩選出四條基因突變的F0代斑馬魚(yú)突變體。經(jīng)過(guò)雜交傳代后，從Fl代中篩選出能夠穩(wěn)定遺傳的四種不同的基因突變類型，分別編號(hào)為statlbS1，statlbS2，statlbS3，statlbS4。其中statllyS1和statlbS2在編碼蛋白質(zhì)氨基酸的外顯子上發(fā)生了小片段基因缺失且缺失的堿基數(shù)目不是三的倍