1、甘肅農業(yè)大學碩士學位論文百合病毒病發(fā)病因素與病毒檢測方法的研究姓名：梁巧蘭申請學位級別：碩士專業(yè)：植物病理學指導教師：徐秉良20040601甘意農監(jiān)大學碩士學位論文種植小麥的地塊發(fā)病重；低洼積水地較高燥地發(fā)病重：不同百合品種對百合病毒的抗病性不同。4百合病毒病病株田間分布型在發(fā)病初期以聚集分布為主；發(fā)病后期以均勻分布為主，病株在田問分布的基本成分為個體群，有明顯的發(fā)病中心。理論抽樣數量的大小決定于田間病株率的高低，當病株率在835—96

2、60％之間，實際抽樣數量為1000、2000、3000株時，其理論抽樣數在558—906、774～1655、888—2286株之間。抽樣方法比較試驗結果表明平行線抽樣法更適合百合病毒病病株田問調查。5將采自百合田的CMVLi用特定寄主菜豆(美國)純化增殖，分離提純。提純的CMVLi粒子經電鏡觀察，紫外掃描證弱為典型的CMVLi粒子。然后焉純化的CMVLi免疫兔子制備抗血清。cMv—Li抗血清效價為1024；商品CMVLi抗血清和自制抗血

3、清對5個百合樣品的ELISA檢測結果一致。采用間接ELISA法對陰、陽性對照材料進行了選擇，并確定了陰、陽性反應的臨界值。用硫酸銨沉淀法提純IgG，制備了辣根過氧化物酶標抗體和堿性磷酸酶標抗體，建立了酶聯免疫檢測系統(tǒng)(EusA—CMVLi)，并對其所要求的各種指標作了合理選擇。結果表明，最適包被抗體和酶標抗體的濃度分別為5pg／ml和20ug／ml，cMV—Li檢測的有效稀釋倍數為1：32。制作了采用培G一瑚沖和培G—AP兩種酶標抗體的

4、對黃瓜花葉病毒百合株系(CMV—n)ELISA檢測的標準曲線，DAS—ELISA、間接ELISA和DIBAELIsA靈敏度比較試驗結果表明，DASELISA檢測的靈敏度較高，是間接一ELISA和DIDA—ELISA靈敏度的4倍。間接一ELISA和DIBA—ELISA的檢測譜比DSA—ELISA寬，對21個百合樣品的CMV檢測結果表明，DIBAELISA的檢出率為6667％，間接一ELISA的檢出率為3809％，分別比DAS—ELISA的