花生白藜蘆醇合酶基因的克隆及原核表達(dá).pdf_第1頁(yè)
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1、白藜蘆醇(三羥基反式芪)存在于少數(shù)幾種植物中,是一種植物抗毒素,同時(shí)藥理學(xué)的研究表明,它具有抗癌抗心血管疾病等生理活性.白藜蘆醇合酶是催化合成白藜蘆醇的關(guān)鍵酶,對(duì)該酶及其基因的研究既有助于更深入地了解該酶的催化合成機(jī)理,又有助于進(jìn)行轉(zhuǎn)基因提高其它作物的抗病性.該實(shí)驗(yàn)的目的是從花生中克隆白藜蘆醇合酶基因,并在大腸桿菌中表達(dá)該基因,為以后開(kāi)展轉(zhuǎn)基因工作以及探索酶的功能的工作奠定基礎(chǔ).該實(shí)驗(yàn)使用反轉(zhuǎn)錄PCR(RT-PCR)的方法,從花生中提取

2、mRNA,反轉(zhuǎn)錄為cDNA,利用白藜蘆醇合酶基因特異性的引物從中擴(kuò)增出目的基因.將目的基因克隆到T-載體pMD-18T上,送檢測(cè)序.結(jié)果表明,目的基因的長(zhǎng)度為1170bp,編碼390個(gè)氨基酸,與Genbank中已有的幾個(gè)花生白藜蘆醇合酶基因的氨基酸序列的相似性為93％-96%.將目的基因亞克隆到表達(dá)載體pQE30-a上,轉(zhuǎn)化到大腸桿菌M15中,經(jīng)測(cè)序表明,目的基因序列及讀碼框均正確,表達(dá)載體構(gòu)建成功.用IPTG誘導(dǎo)重組菌,目的蛋白表達(dá)量

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