1、天津醫(yī)科大學碩士學位論文甲狀腺激素受體新亞型TRβΔ的DNA結合能力研究姓名：胡麗玲申請學位級別：碩士專業(yè)：生物化學與分子生物學指導教師：張鏡宇20100501天津醫(yī)科大學碩十學位論文結合能力，同時檢測單獨的TRl3A、TRl31、RXRa蛋白分別與TREs(DR4)的結合情況。結果1成功構建了pETDuet一1／rRXRa重組表達載體。2成功表達了RXRot融合蛋白：重組質粒pETDuet1／rRXRa轉化菌、pETDuet1／TRI

2、ll轉化菌和pETDuet。1／取腳轉化菌誘導表達產物的SDSPAGE均在約55kD附近出現(xiàn)深染條帶(RXRa約50kD，TRl31約52kD，TRl3A約56kD)，目的蛋白大小與預期基本一致，且主要存在于包涵體中。RXRQ、TRl31、TRl3A的表達量分別達到2138mg／L、2510mg／L、1619mg／L培養(yǎng)基，三種重組蛋白占菌體總蛋白的百分比分別為322％、305％、288％。3包涵體形式的RXRa、TR[31、TRl3A

3、重組蛋白可溶解于高濃度的尿素溶液中，經透析后占上清液的主要部分。4免疫共沉淀證實TRp△及TRpl均能夠與RXRa蛋白分別形成TRl3A／RXRa、TRl31／RXRa雜二聚體。5TRfll、TRl3A兩種蛋白與RXRa形成雜二聚體后均能夠結合TREs(DR4)，而且單獨的RXRa、TRl31、TRl3A蛋白也分別能夠結合TREs(DR4)。結論本文通過構建pETDuet1／rRXRa重組表達載體成功表達了RXRa蛋白。結果證實甲狀腺激

4、素受體TRl3A同TRl31一樣，能與RXRGt形成雜二聚體結合DNA，而且TRp△、TRpl和RXRa三者均具有DNA結合活性。我們的研究結果與Williams報道有所不同，據Williams其文中報道單獨的TRl31、RXRa蛋白均不能夠結合TREs(DR4)，只有在TRl31和RXRa共同孵育形成TRl31／RXRa雜二聚體之后才能與TREs(DR4)結合。而本文顯示TRl3A、TRyl甚至RXRa本身單獨也能結合DR4，但它們是