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![馬鈴薯增強子捕獲系的創(chuàng)建及鑒定.pdf_第1頁](https://static.zsdocx.com/FlexPaper/FileRoot/2019-3/1/9/86c577a9-3f15-4cf3-b221-8b6ecef5806b/86c577a9-3f15-4cf3-b221-8b6ecef5806b1.gif)
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文檔簡介
1、馬鈴薯已在2014年成為我國作為重要的戰(zhàn)略儲備主糧之一,而馬鈴薯的測序工作也于2011年7月完成。測序的馬鈴薯材料為雙單倍體馬鈴薯材料DM1-3-516-R44(DM)和雜合二倍體馬鈴薯材料RH89-039-16(RH)?;跍y序成功的基礎上,世界各國對馬鈴薯相關功能基因組學的研究將全面展開。本研究利用根癌農(nóng)桿菌介導的遺傳轉(zhuǎn)化法,將已成功構建的增強子捕獲T-DNA雙元載體導入馬鈴薯植株中,從而獲得轉(zhuǎn)基因植株,并對突變株系進行篩選和分析。
2、同時結合已經(jīng)發(fā)布的馬鈴薯基因組的測序數(shù)據(jù),開展對馬鈴薯功能基因組學的研究。為后續(xù)建立增強子捕獲系奠定基礎,并加快馬鈴薯功能基因的相關研究。
本研究在兩年時間內(nèi)取得了以下進展:
1.創(chuàng)建了雙單倍體馬鈴薯DM的再生體系。對馬鈴薯莖段、葉片進行脫分化、再分化直接得到健康植株。用于馬鈴薯莖段愈傷組織誘導的培養(yǎng)基為(MS+IAA0.5mg/L+6-BA2.5mg/L);用于馬鈴薯葉片愈傷組織發(fā)生的培養(yǎng)基為(MS+NAA1.0m
3、g/L+6-BA1.0mg/L);用于馬鈴薯愈傷組織分化不定芽的培養(yǎng)基為(MS+6-BA2mg/L+GA30.1mg/L)。
2.創(chuàng)建了雜合二倍體馬鈴薯RH的再生體系。對馬鈴薯莖段、葉片進行脫分化、再分化直接得到健康植株。用于馬鈴薯莖段愈傷組織誘導的培養(yǎng)基為(MS+2,4-D0.5mg/L+ZT1.0mg/L);用于馬鈴薯葉片愈傷組織發(fā)生的培養(yǎng)基為(MS+NAA1.0mg/L+ZT1.0mg/L);用于愈傷組織分化不定芽的培養(yǎng)
4、基為(MS+ZT2mg/L+GA310mg/L)。
3.優(yōu)化了農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化雙單倍體馬鈴薯 DM的條件。將馬鈴薯莖段、葉片放入愈傷組織誘導預培養(yǎng)基中培養(yǎng)10d;利用OD600為0.3的農(nóng)桿菌侵染10min,并放入愈傷誘導培養(yǎng)基中共培養(yǎng)3d;將共培養(yǎng)的組織清洗后放入含有300mg/L的頭孢噻肟鈉(Cef)和8mg/L的潮霉素(Hyg)的愈傷組織誘導預培養(yǎng)基中,培養(yǎng)10d即得到較好的愈傷組織;將較好的愈傷組織放入含有相應抗生素的分化培
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