1、毛白楊（PopulustomentosaCarr.）因其樹(shù)型通直優(yōu)美、樹(shù)冠枝葉茂盛、材質(zhì)紋理細(xì)密，在綠化區(qū)、行道旁、用材林的建設(shè)中均起著重要的作用。但是每年其盛花期雄株產(chǎn)生的花粉、種子成熟期雌株產(chǎn)生的果毛，到處飛散，對(duì)行人帶來(lái)很多不便，除此之外“飛絮”不僅對(duì)安全造成隱患，還嚴(yán)重地污染了環(huán)境。本研究分別以毛白楊室外葉柄、無(wú)菌苗葉片為外植體，建立毛白楊離體組織間接再生體系，對(duì)影響再生的各因素包括外植體種類、植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的種類及濃度等方面進(jìn)

2、行了詳細(xì)研究;并通過(guò)對(duì)轉(zhuǎn)化體系的優(yōu)化，建立了毛白楊的遺傳體系。農(nóng)桿菌介導(dǎo)Barnase基因的遺傳轉(zhuǎn)化，旨在通過(guò)關(guān)閉生殖生長(zhǎng)達(dá)到純營(yíng)養(yǎng)生長(zhǎng)，從而解決毛白楊的“飛絮”問(wèn)題。
　　1高效再生體系的建立
　　在再生體系建立的過(guò)程中，通過(guò)對(duì)比不同消毒方式對(duì)褐污率的影響、外植體種類對(duì)愈傷誘導(dǎo)率及愈傷形態(tài)的影響，分析了外植體種類對(duì)建立再生體系的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn)當(dāng)以葉柄為外植體時(shí)，以75％的乙醇對(duì)毛白楊葉柄進(jìn)行表面處理10s，0.1％的HgC

3、l2消毒6min，為最適宜的消毒方法，此時(shí)褐污率最小僅為8％;而當(dāng)以無(wú)菌苗葉片為外植體時(shí)，可以避免消毒對(duì)外植體造成的損傷。
　　在愈傷誘導(dǎo)的過(guò)程中，通過(guò)對(duì)植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑種類和濃度的選擇，發(fā)現(xiàn)以葉柄為外植體，選用1/2MS培養(yǎng)基附加NAA0.5mg/L、BA0.5mg/L時(shí)，其愈傷誘導(dǎo)率為93％;以無(wú)菌苗葉片為外植體時(shí)，選用1/2MS培養(yǎng)基附加NAA0.25mg/L、BA0.25mg/L、ZT0.25mg/L，此時(shí)愈傷誘導(dǎo)率為100

4、％。此時(shí)，無(wú)菌苗葉片誘導(dǎo)形成的愈傷組織，它的分裂速度要明顯快于葉柄誘導(dǎo)形成的愈傷組織的分裂速度。
　　當(dāng)愈傷長(zhǎng)至直徑1cm左右的小塊，取分裂旺盛的愈傷組織轉(zhuǎn)移至不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基進(jìn)行分化誘導(dǎo)時(shí)，分析了不同濃度的TDZ對(duì)不定芽誘導(dǎo)的影響，并記錄了誘導(dǎo)形成不定芽的形態(tài)學(xué)過(guò)程。結(jié)果發(fā)現(xiàn):當(dāng)以無(wú)菌苗葉片誘導(dǎo)形成的愈傷組織為研究對(duì)象時(shí)，選用1/2MS培養(yǎng)基附加NAA0.25mg/L、BA0.25mg/L、ZT0.25mg/L，添加低濃度的TD

5、Z(0.0001mg/L)，就會(huì)導(dǎo)致所形成的不定芽呈現(xiàn)較嚴(yán)重的玻璃化現(xiàn)象;但不添加TDZ的培養(yǎng)基中，其不定芽誘導(dǎo)率已達(dá)100％;當(dāng)以葉柄誘導(dǎo)形成的愈傷組織為研究對(duì)象時(shí)，發(fā)現(xiàn)1/2MS培養(yǎng)基附加NAA0.5mg/L、BA0.5mg/L再添加0.0015mg/L的TDZ，不定芽誘導(dǎo)率可提高至92.0％，且不定芽生長(zhǎng)健壯。
　　待不定芽生長(zhǎng)至2cm左右時(shí)，移到生根培養(yǎng)基進(jìn)行不定根誘導(dǎo)，分析了MS培養(yǎng)基的鹽濃度、植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑(IBA、N

6、AA)對(duì)生根率及根長(zhǎng)的影響。結(jié)果顯示:采用1/2MS培養(yǎng)基搭配使用NAA0.5mg/L、IBA1.0mg/L時(shí)，所有的無(wú)菌苗均可被誘導(dǎo)形成不定根，平均根長(zhǎng)可達(dá)97.6mm，且無(wú)菌苗生長(zhǎng)健壯。
　　2遺傳轉(zhuǎn)化體系的建立
　　以無(wú)菌苗葉片為外植體，分別從侵染損傷和侵染程度兩個(gè)方面，通過(guò)對(duì)農(nóng)桿菌工程菌液濃度、侵染時(shí)間、共培養(yǎng)時(shí)間等遺傳轉(zhuǎn)化因素的探討，建立了毛白楊的遺傳轉(zhuǎn)化體系。以液體1/2MS培養(yǎng)基作為農(nóng)桿菌菌體重懸液，制備濃度（

7、OD600值）為1.0abs的工程菌液，侵染無(wú)菌苗葉片誘導(dǎo)形成的愈傷9min，共培養(yǎng)24小時(shí)左右，在Cef200mg/mL的適宜選擇壓下，對(duì)轉(zhuǎn)基因植株進(jìn)行抑菌培養(yǎng)。以濃度為25mg/L的PPT對(duì)轉(zhuǎn)化植物進(jìn)行初次篩選得到41株存活植株中，再經(jīng)二次涂抹篩選最終確定其中有5株擬陽(yáng)性植株，13株即顯抗性但抗性很弱的植株，23株假陽(yáng)性植株。將5株擬陽(yáng)性植株及13株即顯抗性但抗性很弱的植株進(jìn)行PCR驗(yàn)證時(shí)發(fā)現(xiàn)，有2株具有Bar基因條帶，初步證明目的