1、在植物生長發(fā)育過程中,有許多類轉(zhuǎn)錄因子參與并調(diào)控,而其中一類轉(zhuǎn)錄因子——MYB轉(zhuǎn)錄因子,是植物中一種比較重要的轉(zhuǎn)錄因子,它構(gòu)成了植物體內(nèi)最大轉(zhuǎn)錄因子家族之一。這類轉(zhuǎn)錄因子家族具有共同的特征,就是在它的N端含有大約52個氨基酸殘基,而這些氨基酸殘基組成了MYB結(jié)構(gòu)域,且該MYB結(jié)構(gòu)域具有高度的保守性。植物中MYB蛋白根據(jù)MYB域重復(fù)序列個數(shù)可分三個亞類:含有二個MYB重復(fù)序列的R2R3-MYB,含有三個相鄰MYB重復(fù)序列的R1R2R3-M

2、YB和其它一些通常只含有一個MYB重復(fù)序列的特異群體統(tǒng)稱為MYB-like蛋白。MYB轉(zhuǎn)錄因子家族在植物體內(nèi),主要參與植物的生長發(fā)育和細(xì)胞代謝,但其中一部分也參與植物對外界的抗逆反應(yīng),在植物受到外界不良條件,比如高溫、傷害、干旱等非生物脅迫時,這些脅迫信號會不斷地激發(fā)相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子的表達(dá)。而這些轉(zhuǎn)錄因子會相互作用于它們相應(yīng)的順式作用元件,然后啟動特定基因的表達(dá),那么,植物會出現(xiàn)一系列生理生化反應(yīng),從而改變了植物對外界不利環(huán)境的抗逆性。MY

3、B轉(zhuǎn)錄因子在植物中是重要轉(zhuǎn)錄因子家族之一,而該類轉(zhuǎn)錄因子也與植物的抗逆性密切相關(guān),其研究主要集中在模式植物中,如擬南芥和水稻。然而,到目前為止,有關(guān)番茄MYB類基因在非生物脅迫過程中的相關(guān)研究較少,利用qRT-PCR技術(shù)研究脅迫條件下番茄MYB類基因的表達(dá)情況也鮮見報(bào)道。且番茄作為一種重要的蔬菜作物,其植株抵抗外界不良環(huán)境的能力是一種重要的農(nóng)藝性狀,因而研究MYB家族基因參與番茄植株脅迫反應(yīng)的分子機(jī)理具有一定潛在的應(yīng)用價值。本研究根據(jù)N

4、CBI數(shù)據(jù)庫登錄的番茄序列,克隆得到大小為1350bp基因片段其ORF為1245 bp,編碼414個氨基酸。表達(dá)模式分析表明,SlMYBL在成熟葉、莖及萼片中表達(dá)量較高。運(yùn)用熒光定量PCR分析表明在外源激素IAA、MeJa、ABA等的處理下SlMYBL基因表達(dá)量上調(diào)。非生物脅迫結(jié)果表明,在高溫、低溫、傷害和鹽處理中該基因表達(dá)也受到不同程度的誘導(dǎo)。本研究主要獲得以下結(jié)果:
　　1、根據(jù)NCBI數(shù)據(jù)庫中登錄的番茄序列,然后設(shè)計(jì)出特異引

5、物,再從野生型番茄AC++中克隆并獲得長度為1350 bp基因片段。
　　2、運(yùn)用信息學(xué)分析SlMYBL蛋白,其具有保守的DNA結(jié)合域:MYB-like,以及C-末端和多個磷酸化位點(diǎn),主要定位于線粒體基質(zhì)和細(xì)胞質(zhì)中,二級結(jié)構(gòu)預(yù)測該蛋白含有26.33％的α螺旋,1.93％的β折疊,6.28％的延伸鏈,65.46％的無規(guī)則卷曲。且與許多已知植物MYB蛋白序列比對相似度高達(dá)到70％。
　　3、在野生型番茄AC++和突變體Nr、ri

6、n各組織中,SlMYBL基因的表達(dá)模式分析發(fā)現(xiàn):SlMYBL基因表達(dá)量較高的組織中有野生型(WT)的幼葉、成熟葉和老葉;而該基因表達(dá)量次之的組織中有根、莖和萼片。在Nr突變體IMG到B+4果實(shí)中的表達(dá)沒有明顯變化,但在突變體rin各個時期果實(shí)中的表達(dá)相對增強(qiáng)。
　　4、熒光定量PCR分析外源激素對SlMYBL基因的表達(dá):野生型番茄植株在外源激素處理后發(fā)現(xiàn),SlMYBL基因受IAA、ABA、MeJa和GA3激素的誘導(dǎo)。
　　5

7、、非生物脅迫對SlMYBL基因的表達(dá):高、低溫處理的番茄植株后SlMYBL基因的表達(dá)上調(diào)。鹽處理后SlMYBL基因表達(dá)也表現(xiàn)為上調(diào),但葉比根表現(xiàn)更為敏感。傷害處理后可誘導(dǎo)SlMYBL基因的表達(dá),但該基因?qū)Φ捻憫?yīng)較慢。
　　6、構(gòu)建了pBI121-SlMYBL超表達(dá)載體和pBIN19-SlMYBL沉默載體,且通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)方法將超表達(dá)載體和沉默載體成功轉(zhuǎn)入番茄AC++子葉外植體中,并獲得了多個番茄轉(zhuǎn)基因株系。
　　7、轉(zhuǎn)基