1、呼吸系統(tǒng)在機體內(nèi)不僅起到氣體交換的作用，同時由于該系統(tǒng)相對開放的特點，在機體中也發(fā)揮著免疫防御的作用。外源性抗原侵入機體時，首先啟動天然免疫系統(tǒng)，通過模式識別受體（pattern recognition receptors，PRRs）對抗原進行識別，引起一系列免疫反應，實現(xiàn)對病原菌或外來抗原的防御作用。Toll樣受體(tolllikereceptors，TLRs)是一類廣泛存在于多種組織器官中的模式識別受體，在天然免疫和獲得性免疫中起到

2、了連接作用。TLR4被認為在對抗革蘭氏陰性菌中發(fā)揮著重要作用。禽類中細菌性呼吸性疾病的發(fā)病率呈現(xiàn)上升的趨勢，但是關于TLR4在雞呼吸系統(tǒng)免疫反應中的作用的研究報道還比較少。因此本項目擬以雞為研究對象，采用免疫組織化學染色、細胞特異性染色、ELISA等方法探究雛雞受到LPS刺激后，氣管和肺的組織學變化和TLR4在氣管和肺中的分布及表達變化，以此來探討LPS刺激對家禽呼吸系統(tǒng)的影響及TLR4在呼吸性疾病中的作用。主要研究結(jié)果如下:
　

3、　1、LPS刺激對雞氣管組織學結(jié)構的影響
　　光鏡下觀察，雞氣管黏膜層分為上皮和固有層:上皮為假復層纖毛柱狀上皮，主要有纖毛柱狀細胞和杯狀細胞，二者相互夾雜著分布;雛雞黏膜下層的氣管腺在對照組和LPS組中都很少;1周齡內(nèi)的雛雞氣管的透明軟骨環(huán)呈不完整的圓片狀，在軟骨片交接處經(jīng)常見到兩層軟骨。LPS刺激36h和72h時，部分上皮細胞排列疏松，細胞之間的分界模糊，有些柱狀細胞纖毛脫落;氣管上皮的杯狀細胞數(shù)量從刺激后12h開始減少，36

4、h和72h比12h稍有增加，但仍然少于對照組(P＜0.05)。結(jié)果說明，腹腔注射LPS可以導致氣管發(fā)生損傷。
　　2、LPS刺激對雞氣管中TLR4表達分布的影響
　　通過免疫組織化學染色的方法研究TLR4在雛雞氣管中的表達分布，結(jié)果顯示在對照組和LPS組中均有TLR4陽性產(chǎn)物分布，且主要在纖毛柱狀細胞的纖毛上表達，上皮杯狀細胞中不表達TLR4，在固有層和黏膜下層中也可見棕黃色的TLR4陽性產(chǎn)物。LPS刺激后，TLR4在雛雞氣

5、管中的表達升高，且在刺激后36h到達高峰，顯著高于對照組(P＜0.05)。TLR4在LPS刺激前后的表達變化提示在受到病原菌入侵時，氣管上皮細胞可能通過TLR4對其發(fā)揮作用。
　　3、LPS刺激對雞肺組織學結(jié)構的影響
　　光鏡下觀察，雛雞肺由許多肺小葉組成，小葉與小葉之間為結(jié)締組織。三級支氣管管腔在肺小葉中央，管腔周圍是肺房的開口，開口處有平滑肌束;肺房呈囊腔狀，上皮為單層扁平上皮，細胞外有彈性纖維;肺毛細管上皮是單層扁平上

6、皮，細胞外有網(wǎng)狀纖維和毛細血管。LPS刺激后12h和36h，部分肺小葉之間界限模糊，肺房管腔變狹窄，甚至減少，肺毛細管充盈，細胞受擠壓而密集，肺組織淤血，在某些三級支氣管管腔、肺房、肺毛細管和血管中均有大量紅細胞分布，肺間質(zhì)中散在分布有白細胞;LPS刺激后72h，肺的組織學結(jié)構比前兩組有所好轉(zhuǎn)，但在三級支氣管管腔中仍有紅細胞分布，肺小葉結(jié)構凌亂。該結(jié)果說明腹腔注射LPS可引起肺發(fā)生損傷和炎癥。
　　4、LPS刺激對雞肺中TLR4表

7、達分布的影響
　　通過免疫組織化學染色的方法研究了TLR4在雛雞肺中的表達分布，結(jié)果顯示TLR4在對照組和刺激組雛雞的肺中均有分布。陽性細胞主要表達在肺間質(zhì)和血管中的細胞。通過連續(xù)切片進行HE染色、Schiff-亞甲藍染色和免疫組化染色可以發(fā)現(xiàn)TLR4表達為陽性的細胞，可能為漿細胞、單核細胞或巨噬細胞、淋巴細胞或異嗜性粒細胞。LPS刺激12h和36h，肺TLR4的表達升高，72h時TLR4表達降低，且與12h和36h相比差異顯著(

8、P＜0.05)。TLR4在肺中的表達分布提示，受到病原菌刺激后，肺可能通過巨噬細胞、異嗜性粒細胞、淋巴細胞上的TLR4介導活化細胞，引起炎癥反應等，對侵入機體的病原菌起到防御作用。
　　5、LPS刺激對雞氣管和肺中SIgA表達變化的影響
　　ELISA結(jié)果顯示，黏膜免疫的主要效應因子分泌型IgA(SIgA)在雛雞氣管中的表達隨著LPS刺激時間的延長先升高后逐漸降低，12h表達量最高，72h時表達最低。在雛雞肺中隨著刺激時間的