1、Ca2+/CaM信號轉(zhuǎn)導(dǎo)系統(tǒng)已被證實(shí)在小麥抵抗葉銹菌侵染的防衛(wèi)反應(yīng)中具有重要作用。為豐富對該信號轉(zhuǎn)導(dǎo)系統(tǒng)的研究，以TaCaM4-1為誘餌進(jìn)行的酵母雙雜交試驗(yàn)在受葉銹菌侵染的小麥葉片cDNA文庫中篩選出7個CaM結(jié)合蛋白陽性克隆基因，其中包括TaCAMTA4基因。本試驗(yàn)是在酵母雙雜交試驗(yàn)的基礎(chǔ)上進(jìn)行的。CAMTA（calmodulin-binding transcription activator，鈣調(diào)素結(jié)合的轉(zhuǎn)錄激活子）基因家族是一類具

2、有CaM（calmodulin，鈣調(diào)素）結(jié)合活性的轉(zhuǎn)錄因子家族，其具有四個典型的保守結(jié)構(gòu)域，即CG-1結(jié)構(gòu)域、TIG結(jié)構(gòu)域、ANK repeat結(jié)構(gòu)域及CaM結(jié)合結(jié)構(gòu)域。研究發(fā)現(xiàn)，CAMTA在植物生長發(fā)育和抵抗逆境脅迫（如病原菌侵染、植物激素、冷、熱及干旱等）過程中起到重要作用。本試驗(yàn)以TaCAMTA4基因?yàn)檠芯繉ο?，進(jìn)行了如下試驗(yàn)并獲得相應(yīng)試驗(yàn)結(jié)果:
　　 (1)通過一對一酵母共轉(zhuǎn)化試驗(yàn)將7個陽性克隆基因分別與誘餌質(zhì)粒共轉(zhuǎn)化酵

3、母細(xì)胞通過檢測報告基因的表達(dá)進(jìn)一步驗(yàn)證了7個陽性克隆。
　　 (2)利用5'-RACE PCR擴(kuò)增TaCAMTA4基因5'端未知序列并通過序列拼接獲得TaCAMTA4基因cDNA全長2704bp。
　　 (3)利用生物信息學(xué)分析TaCAMTA4保守結(jié)構(gòu)域，通過同源比對確定該基因?yàn)镃AMTA家族成員，并通過與擬南芥中6個AtCAMTA基因的同源比對對該基因正式命名為TaCAMTA4。
　　 (4)利用雙分子熒光互補(bǔ)

4、試驗(yàn)在煙草細(xì)胞中驗(yàn)證了TaCAMTA4蛋白與TaCaM4-1可在細(xì)胞質(zhì)及細(xì)胞核中發(fā)生相互作用。
　　 (5)電泳遷移率變動分析證實(shí)，該蛋白與TaCaM4-1的互作位點(diǎn)位于C-端。
　　 (6)構(gòu)建了TaCAMTA4基因DNA結(jié)合區(qū)的原核表達(dá)載體pET28a-CG-1，并確定了其在大腸桿菌原核表達(dá)菌株BL21中的最佳誘導(dǎo)條件。
　　 (7)通過實(shí)時定量PCR方法檢測了親和組合與不親和組合中該基因在小麥?zhǔn)苋~銹菌侵染后

5、不同時間點(diǎn)的表達(dá)量。結(jié)果顯示，在不親和組合中，在侵染后4h，TaCAMTA4表達(dá)量即出現(xiàn)下降趨勢并隨時間點(diǎn)逐漸降低，在8h降至最低，約為初始水平的一半，從24h起表達(dá)量逐漸恢復(fù)，直至48h恢復(fù)至初始水平;在親和組合中，TaCAMTA4的表達(dá)量有微弱的下降趨勢，其變化趨勢相較不親和組合不明顯。初步推斷TaCAMTA4在小麥抵抗葉銹菌侵染過程中可能起負(fù)調(diào)控作用。
　　 上述結(jié)果對進(jìn)一步研究TaCAMTA4基因在小麥抵抗葉銹菌侵染的防