1、仿刺參(Apostichopus japonicus)屬于棘皮動物門,海參綱,仿刺參屬,是重要的水產(chǎn)養(yǎng)殖品種。針對仿刺參免疫基因及其應(yīng)答機制的研究將為病害預(yù)防奠定理論基礎(chǔ)。
　　Toll樣受體(Toll-like receptor,TLR)是I型跨膜蛋白,屬于先天性免疫系統(tǒng)中最古老的模式識別受體。本實驗采用RACE方法,首次從仿刺參體腔細胞中克隆得到了兩個TLRs的cDNA全長。將兩條序列分別進行BLASTX比對,結(jié)果顯示一條序列

2、和不同物種的TLR3序列相似,另一條序列和不同物種的Toll序列相似,因此分別命名為AjTLR3和AjToll。AjTLR3的cDNA全長為3483bp,開放閱讀框長2679bp,編碼892個氨基酸;AjToll的cDNA全長為4211bp,開放閱讀框長2853bp,編碼950個氨基酸。用SMART軟件進行結(jié)構(gòu)預(yù)測,AjTLRs都具有典型的TLR結(jié)構(gòu):胞外亮氨酸重復(fù)序列LRR(Leucine-rich repeat,LRR)區(qū),跨膜區(qū)(

3、Transmembrane,TM)和胞內(nèi)TIR(Toll/interleukin-1 receptor)區(qū),說明TLR在脊椎動物進化過程中是高度保守的。系統(tǒng)進化分析發(fā)現(xiàn)AjTLR3和AjToll分別與脊椎動物類TLR(Vertebrate-like TLRs,V-TLRs)和原口動物類 TLR(Protostome-like TLRs,P-TLRs)聚集在一起,表明仿刺參中存在兩種不同類型的TLRs。文中采用實時熒光定量 PCR的方法檢

4、測兩個基因在各個組織中的表達量以及免疫刺激后各組織表達量的變化情況。結(jié)果顯示,兩個AjTLRs在體壁、體腔細胞、管足、腸和呼吸樹中都有表達,并且在呼吸樹中表達量最高,而在其它組織中表達量相對較低。通過對仿刺參病害方面的研究總結(jié)發(fā)現(xiàn),目前所鑒定出的病原物主要有革蘭氏陽性菌、革蘭氏陰性菌、真菌和病毒。因此本實驗采用了四種病原物的類似物:肽聚糖(peptidoglycan,PGN)、脂多糖(Lipopolysaccharides,LPS)、酵

5、母聚糖(Zymosan A)和聚肌胞苷酸(Polyinosinic-polycytidylic acid,Poly I:C)對仿刺參進行體腔免疫刺激。熒光定量結(jié)果分析表明這兩個基因在不同的組織中針對不同的刺激所呈現(xiàn)的表達模式不同:在PGN的刺激下,AjTLRs在體腔細胞中的表達變化最顯著;在LPS和PolyI:C刺激下,AjTLRs在管足中表達變化最顯著;在Zymosan A的刺激下,AjTLRs在呼吸樹中表達變化最顯著,由此推測AjT