1、黃萎病是由土傳病原真菌大麗輪枝菌（VerticilliumdahliaeKleb）所引起的一種病害，并且是一種引起很多作物嚴(yán)重經(jīng)濟(jì)損失的重要病害。由于大麗輪枝菌具有宿主范圍廣、能夠產(chǎn)生微菌核等特點(diǎn)，所以對(duì)其防治比較困難。實(shí)際應(yīng)用中，黃萎病的防治一般使用化學(xué)制劑，但是化學(xué)制劑會(huì)造成嚴(yán)重的環(huán)境污染。隨著人們對(duì)環(huán)境問(wèn)題的逐漸重視，可以替代化學(xué)制劑的生防制劑逐漸被應(yīng)用。
　　在前期研究中，本課題組從棉花植株內(nèi)分離得到的解淀粉芽孢桿菌41B

2、-1和銅綠假單胞菌841P-3對(duì)大麗輪枝菌具有顯著的抑制作用。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)篩選這兩種生防菌的利福平抗性突變體即41B-1R和841P-3R，用作進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)研究。解淀粉芽孢桿菌41B-1R和銅綠假單胞菌841P-3R能夠在小麥、玉米、大豆和水稻的根內(nèi)定殖，且41B-1R比841P-3R具有更穩(wěn)定的定殖能力。但是，41B-1R、841P-3R在不同的農(nóng)作物中定殖能力有所不同。
　　在溫室實(shí)驗(yàn)中，通過(guò)接種病原菌V107以及41B-1R或8

3、41P-3R到棉花根圍土壤中，進(jìn)而研究土壤微生物群落結(jié)構(gòu)的變化、生防菌41B-1R和841P-3R的定殖能力及生防效果。本實(shí)驗(yàn)將平板分離法與PCR-DGGE相結(jié)合來(lái)考察棉花根圍土壤中微生物群落數(shù)量和結(jié)構(gòu)的變化。利福平抗性平板分離實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn):41B-1R和841P-3R能夠在土壤和棉花根內(nèi)定殖，且隨著時(shí)間增長(zhǎng)其定殖數(shù)量都有所下降，但41B-1R定殖數(shù)量下降幅度較小。與在其他作物中一樣，在土壤及棉花根內(nèi)41B-1R比841P-3R具有更強(qiáng)的定

4、殖能力。
　　平板分離實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:假單胞菌841P-3R以及病原菌V107在短時(shí)間內(nèi)減少了棉花根圍土壤中可培養(yǎng)細(xì)菌的數(shù)量，但增加了可培養(yǎng)真菌數(shù)量且作用時(shí)間較長(zhǎng);然而芽孢桿菌41B-1R對(duì)于可培養(yǎng)細(xì)菌和真菌的影響并不顯著。生防菌與病原菌處理對(duì)可培養(yǎng)細(xì)菌和真菌的影響隨著時(shí)間的變化最終基本消失。細(xì)菌DGGE圖譜表明:處理后一周，病原菌V107顯著地影響了細(xì)菌群落結(jié)構(gòu)，在此基礎(chǔ)上接種841P-3R時(shí)這種效應(yīng)會(huì)有所減弱，但接種41B-1R

5、這種效應(yīng)并沒(méi)有減弱;而處理后三周，這些處理對(duì)細(xì)菌群落結(jié)構(gòu)都沒(méi)有顯著影響。真菌DGGE圖譜表明:處理后一周，存在V107并接種41B-1R或841P-3R對(duì)真菌群落的影響與單獨(dú)接種V107相似，這種現(xiàn)象與對(duì)細(xì)菌群落結(jié)構(gòu)的影響是相反的。然而處理后五周，這兩個(gè)處理相對(duì)于單獨(dú)接種V107對(duì)真菌群落的影響更顯著。生防菌41B-1R或841P-3R與V107分別對(duì)芽孢桿菌群落結(jié)構(gòu)以及假單胞菌群落結(jié)構(gòu)的影響與對(duì)細(xì)菌群落結(jié)構(gòu)影響較為相似。
　　溫