1、多聚免疫球蛋白受體(polymeric immunoglobulin receptor，pIgR)是黏膜免疫系統(tǒng)的關(guān)鍵因子，能夠介導(dǎo)多聚免疫球蛋白向黏液中的轉(zhuǎn)運(yùn)和分泌。pIgR的有效分泌是多聚免疫球蛋白發(fā)揮黏膜防御功能的必要條件。隨著對(duì)魚類免疫球蛋白研究的深入，pIgR的研究也成為熱點(diǎn)。pIgR在生物進(jìn)化過程中非常保守，目前已經(jīng)在多種硬骨魚中展開了廣泛的研究。
　　本論文克隆了大菱鲆(Scophthalmus maximus) p

2、IgR的基因全序列，分析了該基因在不同組織內(nèi)的差異表達(dá)情況以及免疫刺激后在不同組織中的應(yīng)答表達(dá)，并對(duì)其進(jìn)行體外表達(dá)，研制出大菱鲆pIgR多克隆抗體，利用該多抗研究了pIgR在4種黏膜組織中的定位，為進(jìn)一步探討pIgR的特性及功能奠定了基礎(chǔ)。具體的研究結(jié)果如下：
　　利用同源克隆和cDNA末端快速擴(kuò)增技術(shù)(rapid amplification of cDNA ends，RACE)，首次得到了大菱鲆pIgR完整的cDNA序列，全長1

3、584bp，該序列包含一個(gè)1005 bp的開放閱讀框及5'和3'UTR，編碼334個(gè)氨基酸。同源性比較發(fā)現(xiàn)大菱鲆pIgR氨基酸序列與牙鲆(Paralichthys olivaceus)、斜帶石斑魚(Epinephelus coioides)、紅鰭東方鲀(Takifugu rubripes)的序列相似性分別是74％、74%和59%，表現(xiàn)出較高的保守性。多序列比對(duì)顯示硬骨魚pIgR包含兩個(gè)ILD(Ig-like domain)，分別對(duì)應(yīng)哺乳

4、類的ILD1和ILD5區(qū)域。系統(tǒng)進(jìn)化樹分析表明，大菱鲆pIgR和牙鲆的聚為一支。
　　利用半定量RT-PCR檢測pIgR在健康大菱鲆各組織中的差異表達(dá)，結(jié)果顯示pIgR在健康大菱鲆各組織中均有表達(dá)，但表達(dá)水平不同，其中在黏膜相關(guān)淋巴組織中表達(dá)最強(qiáng)，該基因在皮膚、鰓、胃、腸中的表達(dá)量最高，肝臟、脾和頭腎次之，在肌肉中的表達(dá)量是最低的，可以說明該基因與大菱鲆的黏液免疫球蛋白的轉(zhuǎn)運(yùn)密切相關(guān)。經(jīng)滅活的鰻弧菌菌液浸泡處理后，實(shí)時(shí)熒光定量PC

5、R檢測結(jié)果顯示，大菱鲆各組織中pIgR的相對(duì)表達(dá)量在72h內(nèi)均呈現(xiàn)先增加后減少的趨勢(shì)，在48h內(nèi)均有一個(gè)最高值出現(xiàn)，且黏膜相關(guān)淋巴組織中峰值出現(xiàn)較早，說明pIgR在硬骨魚類黏膜免疫中發(fā)揮了重要作用。
　　成功地構(gòu)建了表達(dá)大菱鲆pIgR ORF的重組質(zhì)粒，誘導(dǎo)表達(dá)后得到包涵體形式的pIgR重組蛋白，分子量為58.8kDa。以純化的pIgR重組蛋白為抗原，獲得鼠抗大菱鲆pIgR抗血清。Western blotting結(jié)果顯示，鼠抗大菱

6、鲆pIgR抗血清可與重組蛋白發(fā)生特異性結(jié)合。
　　利用大菱鲆pIgR多克隆抗體和免疫組織化學(xué)技術(shù)，對(duì)大菱鲆的皮膚、鰓、胃和腸4種黏膜組織進(jìn)行了pIgR定位觀察，發(fā)現(xiàn)pIgR在這4種組織中均有分布，且主要分布在上皮細(xì)胞的表面，與其結(jié)合并轉(zhuǎn)運(yùn)多聚免疫球蛋白的功能相對(duì)應(yīng)，為pIgR在硬骨魚類黏膜免疫中發(fā)揮重要作用奠定組織結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)。
　　以上所有的研究結(jié)果表明，pIgR和多聚免疫球蛋白的轉(zhuǎn)運(yùn)密切相關(guān)，在魚類黏膜免疫中發(fā)揮著重要的作用