1、鴨病毒性腸炎(duckvirusenteritis，DVE)，是由鴨腸炎病毒(duckenteritisvirus，DEV)引起的鴨、鵝及天鵝等雁形目禽類的一種急性、熱性、敗血性傳染病，其特點是流行廣泛，傳播迅速，發(fā)病率和死亡率高，嚴重危害我國水禽養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展。鴨腸炎病毒屬于α-皰疹病毒科，gB和gC是其兩種重要的囊膜糖蛋白，在病毒感染宿主細胞過程中的受體識別和吸附過程中起重要作用。本研究將對DEVgB和gC主要抗原域的編碼區(qū)進行了克隆

2、和原核表達，研制針對gB和gC的單克隆抗體，為進一步研究DEV的生物學特性和建立快速、準確、特異的檢測方法奠定基礎。
　　 本研究首先設計了5對針對gB和gC基因的特異性引物，采用PCR擴增DEV標準強毒株DPV-F37的5個基因片段，將PCR產(chǎn)物純化后克隆到pGEX-6P1載體上，測序成功后分別轉化BL21(DE3)感受態(tài)細胞，挑選轉化成功的陽性克隆，用IPTG進行誘導表達，收獲細菌蛋白進行SDS-PAGE和WesternBl

3、ot鑒定，并對誘導表達條件進行了優(yōu)化。重組蛋白均能與DEV特異性多抗血清反應，說明重組蛋白具有良好的反應原性。
　　 以超速離心純化的DEV作為免疫原，與等體積弗氏完全佐劑混勻乳化，免疫BALB/c小鼠，四免兩周后以純免疫原加強免疫，4d后取小鼠脾細胞與骨髓瘤細胞SP2/0融合。以純化的重組蛋白gB和gC為包被原，建立篩選抗DEV-gB和抗DEV-gC蛋白單克隆抗體的間接ELISA方法，對篩選出的陽性孔采用有限稀釋法進行亞克隆，

4、獲得7株穩(wěn)定分泌單克隆抗體的雜交瘤細胞株，分別命名為6F7、3G11、4B5、(1)A12、2H9、4D4和10A6，其中4B5和1A12為IgG2b，3G11和2H9為IgM，其余三株均為IgG1。雜交瘤細胞在體外經(jīng)15代連續(xù)傳代培養(yǎng)仍能持續(xù)、穩(wěn)定地分泌抗體。利用Westernblot實驗對7株單抗識別的抗原肽段進行初步分析，結果表明10A6能與gB1反應，1A12能與gB3反應，6F7、3G11、4B5、2H9和4D4能與gC2反應