1、活性氧基團(tuán)(ROS)被認(rèn)為是不利于卵母細(xì)胞體外成熟和胚胎體外發(fā)育的因素。在體外培養(yǎng)條件下，胚胎遇到比體內(nèi)更多的氧化因子。褪黑素可以提高卵母細(xì)胞質(zhì)量，使卵母細(xì)胞免于氧化危害。褪黑素和其代謝物組成了清除ROS的高效的級聯(lián)反應(yīng)，褪黑素有別于其他的抗氧化劑就是因?yàn)檫@個(gè)特性。
　　 本研究探討在水牛卵母細(xì)胞體外成熟液和胚胎培養(yǎng)液中添加褪黑素對卵母細(xì)胞體外成熟和胚胎發(fā)育的影響。
　　 試驗(yàn)一，在水牛卵母細(xì)胞體外成熟培養(yǎng)液中，分別添加

2、三種濃度的褪黑素，即10-10mol/L，10-9mol/L，10-8mol/L，不添加為對照組。目的在于探討添加不同濃度褪黑素的成熟液水牛卵母細(xì)胞的成熟情況。Ⅳmol/L24h后，以第一極體的排出作為成熟標(biāo)準(zhǔn)。試驗(yàn)結(jié)果表明，10-9mol/L試驗(yàn)組成熟率與其他試驗(yàn)組相比，差異不顯著(46.28±1.74％vs43.15±5.24％，43.40±3.12％，P>0.05)，但顯著高于對照組(46.28±1.74％vs32.90±2.21

3、％，P<0.05)。
　　 試驗(yàn)二，僅在胚胎培養(yǎng)液中添加褪黑素情況下，10-8mol/L組分裂率與其他組相比，差異不顯著(59.6％vs53.6％，49.5％，48.O％，P>0.05)，然而，其囊胚率顯著高于對照組(34.3％vs20.6％，P<0.05)。根據(jù)試驗(yàn)一結(jié)果，在成熟培養(yǎng)階段添加最優(yōu)濃度(10-9mol/L)褪黑素的同時(shí)，在胚胎培養(yǎng)液中也添加不同濃度的褪黑素(10-8mol/L，10-9mol/L，10-10mol

4、/L，0mol/L)。結(jié)果表明，10-9mol/L組分裂率與其他組相比無顯著差異(70.0％vs64.8％，65.2％，60.9％，P>0.05)，囊胚率與其他試驗(yàn)組相比也沒有顯著差異(28.9％vs15.4％，26.1％，25.3％，P>0.05)，但顯著高于對照組(28.9％vs15.4％，P<0.05)。
　　 試驗(yàn)三，在水牛卵母細(xì)胞成熟培養(yǎng)液中分為添加褪黑素(試驗(yàn)組)和不加褪黑素(對照組)，IVM24h后，通過DCHFD

5、A熒光染色方法測定水牛卵母細(xì)胞中的ROS含量。結(jié)果表明，與對照組的熒光強(qiáng)度相比，褪黑素處理組的ROS水平顯著低于對照組。
　　 試驗(yàn)四，通過實(shí)時(shí)定量PCR測定線粒體拷貝數(shù)。在水牛卵母細(xì)胞成熟液中添加10-9mol/L褪黑素和不加褪黑素，IVM24h。試驗(yàn)組和對照組的拷貝數(shù)沒有差別。這說明褪黑素對線粒體拷貝數(shù)沒有影響。
　　 本研究結(jié)果表明，褪黑素可以提高水牛卵母細(xì)胞體外成熟率和早期胚胎體外發(fā)育率，同時(shí)還參與清除活性氧的過