ZmBT1、ZmAATP基因的克隆及轉(zhuǎn)ShYS、BRi基因玉米植株的獲得與鑒定.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、玉米作為當(dāng)今世界重要的糧食作物,其籽粒中淀粉含量高達(dá)70%~80%,提高玉米胚乳中淀粉含量有利于增加玉米產(chǎn)量。轉(zhuǎn)基因技術(shù)是改良玉米遺傳性狀,提高玉米產(chǎn)量的重要手段。
   在禾本科作物中,淀粉合成的前體ADP-葡萄糖(ADP-Glc)在細(xì)胞質(zhì)中生成,經(jīng)跨膜轉(zhuǎn)運到淀粉體內(nèi)參與淀粉合成。通過增強ADP-Glc進(jìn)入質(zhì)體的轉(zhuǎn)運能力,可以有效的提高淀粉合成效率。本研究克隆得到玉米ADP-葡萄糖轉(zhuǎn)運蛋白基因ZmBT1和玉米ATP-ADP轉(zhuǎn)運

2、蛋白基因ZmAATP。ZmBT1蛋白屬于腺苷酸轉(zhuǎn)運載體系統(tǒng),在玉米植株內(nèi)組成型表達(dá)。ZmAATP蛋白與ATPase親緣關(guān)系較近,該基因的表達(dá)隨著玉米籽粒的發(fā)育和物質(zhì)積累而逐漸升高。我們分別構(gòu)建了由組成型啟動子(Ubi)和胚乳特異型啟動子(GluAI)驅(qū)動的ZmBT1基因和ZmAATP基因的過量表達(dá)載體,為進(jìn)一步研究該基因在玉米中的生物學(xué)功能,進(jìn)一步進(jìn)行玉米遺傳改良奠定了基礎(chǔ)。
   本研究通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)的玉米幼胚轉(zhuǎn)化體系,將修飾

3、后的淀粉合成ADP葡萄糖焦磷酸化酶基因(ShYS)及淀粉分支酶基因的RNAi表達(dá)盒(BRi)成功的轉(zhuǎn)入玉米Q319自交系中。實驗共侵染外植體14661個,獲得T0代607株成活的轉(zhuǎn)基因植株,最終得到170個結(jié)實的T0代轉(zhuǎn)基因株系。從T0代種子中,選擇103個株系進(jìn)行T1代種植,并對T1代進(jìn)行考種。PCR檢測獲得10個穩(wěn)定表達(dá)的轉(zhuǎn)基因株系,其中,ubi:BRi基因型7株,ubi:ShYS基因型3株。選取這10個株系的種子,在T2代分別在基

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