1、喹賽多是喹噁啉類新品種，對畜禽及魚類均具有廣譜抗菌、促生長和提高飼料利用率的作用，且與同類藥物相比毒性小、安全性高，具有廣闊的開發(fā)應(yīng)用前景。作為食品動物用藥，食品安全性是重要的研究內(nèi)容之一。殘留消除研究是食品動物用藥安全性評價的核心內(nèi)容之一，也是確定殘留標志物、殘留靶組織及制定休藥期等食品安全性標準的直接科學(xué)依據(jù)。本研究在放射性示蹤研究的基礎(chǔ)上，按推薦劑量和生產(chǎn)條件長期飼喂喹賽多，開展喹賽多及其主要代謝物在豬、雞和魚體內(nèi)的殘留消除研究，

2、進一步確證喹賽多在食品動物體內(nèi)的殘留標志物與靶組織，提出休藥期標準，為喹賽多的食品殘留監(jiān)控提供明確的監(jiān)控對象與技術(shù)標準。同時考察喹賽多及其代謝物在環(huán)境中降解規(guī)律，為合理評價喹賽多的環(huán)境安全性提供科學(xué)依據(jù)。
　　 1.喹賽多及其主要代謝物在豬、雞和魚可食性組織中殘留檢測方法的建立
　　 多殘留檢測方法的建立：通過對樣品前處理及液相色譜條件的優(yōu)化，確定最佳條件，建立了喹賽多及其5種主要代謝物(Cy1、Cy2、Cy4、Cy6、

3、Cy12)在豬、雞和魚可食性組織中的高效液相色譜殘留檢測方法。樣品先用1%偏磷酸10%乙腈50%甲醇提取，經(jīng)HLB固相萃取小柱凈化濃縮，再用三氯甲烷反萃HLB柱的洗脫液，達到進一步除雜的效果，用HPLC在320nm紫外波長下測定。結(jié)果顯示，豬、雞和魚可食性組織中，Cyx、Cy1、Cy2、Cy6和Cy12在肝臟、腎臟、肌肉和脂肪(或皮脂)中的LOQ均為20μg/kg；Cy4在四種組織中的LOQ均為40μg/kg。在添加不同定量限濃度水平上

4、，平均回收率介于68.0%～79.5%之間，變異系數(shù)≤9.6%。
　　 脫二氧喹賽多單殘檢測方法的建立：通過對樣品前處理及液相色譜條件的優(yōu)化，建立了脫二氧喹賽多在豬、雞和魚可食性組織中的高效液相色譜殘留檢測方法。2g組織用乙酸乙酯提取兩次，合并提取液氮氣吹干，用HPLC在280nm紫外波長下測定。結(jié)果顯示，在豬、雞和魚可食性組織中，Cy1的最低定量限為20μg/kg，在添加不同定量限濃度水平上，平均回收率為71.4%～78.4%

5、之間，變異系數(shù)≤10%。
　　 2.喹賽多在豬、雞和魚體的殘留消除研究
　　 健康三元雜交豬25頭、1日齡科寶肉雞30只和健康鯉魚50尾分別連續(xù)飼喂含喹賽多150mg/kg(魚餌料中喹賽多含量為100mg/kg)的加藥飼料60天、40天和30天，于停藥后不同時間點宰殺動物，取肝臟、腎臟、肌肉、脂肪(皮脂或皮膚)和魚腸道，分別按上述良好總方法測定喹賽多及其代謝物的殘留量。結(jié)果如下：
　　 豬：停藥6h，肝臟和腎臟中

6、均檢出喹賽多、脫二氧喹賽多和喹噁啉-2-羧酸，殘留量為21.8μg/kg-55.0μg/kg。其中脫二氧喹賽多在腎臟中持續(xù)3天可檢出，喹賽多和喹噁啉-2-羧酸在肝腎中持續(xù)時間均為停藥后6h或ld。肌肉中停藥6h，能檢測到喹賽多和喹噁啉-2-羧酸，殘留量分別為27.5μg/kg和37.6μg/kg；停藥1d后僅能檢測到喹噁啉-2-羧酸，之后未檢出喹賽多相關(guān)殘留物。脂肪中停藥6h，僅檢出少量的喹賽多和N’-(喹噁啉-2-甲基)-氰乙酰肼，殘

7、留量分別為22.2μg/kg-34.6μg/kg，之后未檢出相關(guān)殘留物。結(jié)果證明，喹賽多在豬體內(nèi)的殘留量低、殘留消除迅速，殘留標志物為脫二氧喹賽多，殘留靶組織為腎臟。結(jié)合毒理學(xué)研究和代謝研究結(jié)果，推算出喹賽多在豬腎臟的最高殘留限量為32.4mg/kg，以此為依據(jù)，喹賽多在豬的休藥期為零天。
　　 雞：停藥6h，肝臟中檢測到了四種化合物(Cyx，Cy1，Cy6，Cy12)，殘留量為24.7-49.7μg/kg。Cy1和Cy6在停藥

8、24h后不可檢出，喹賽多和Cy12僅停藥6h可檢出，之后不可檢出。腎臟中檢出五種化合物(Cyx，Cy1，Cy4，Cy6，Cy12)，殘留量為20.5-53.6μg/kg。Cy1和Cy6分別于停藥3d和1d后消除至檢出限以下，其余殘留物均僅在停藥6h可檢出，之后消除完全。肌肉和脂肪中在停藥6h僅檢測到了Cy12，殘留量在24.7-53.6μg/kg范圍內(nèi)。停藥12h，脂肪中檢出少量Cy4，而肌肉中檢測不到任何化合物。結(jié)合毒理學(xué)研究和代謝研

9、究結(jié)果，推算出喹賽多在雞腎臟的最高殘留限量為32.4mg/kg，以此為依據(jù)，喹賽多在雞的休藥期為零天。
　　 魚：停藥6h，五種組織中均檢測到了Cyx、Cy1、Cy4和Cy6四種化合物，殘留量在22.5-42.8μg/kg范圍內(nèi)。肝臟和腎臟中，Cy4停藥6h后即不可檢出，Cyx、和Cy6在停藥24h仍可檢出少量，之后不可檢出。Cy1在肝臟中停藥3天仍可檢出21.0±4.3μg/kg，但腎臟中停藥3天不可檢出；肌肉中停藥6h后各殘

10、留物均消除至檢出限以下。魚皮Cy1和Cy6在停藥24h仍可檢出，喹賽多和Cy4僅在停藥后6h可檢出。結(jié)果證明，喹賽多在魚殘留量低、殘留消除迅速，殘留靶組織為腸道，殘留標志物為Cy1。
　　 3.喹賽多在環(huán)境中的降解規(guī)律研究
　　 在空白豬糞中添加氚標喹賽多，研究排泄物中殘留藥物在廄肥、土壤和小白菜中的降解與轉(zhuǎn)歸。200g空白豬糞中添加氚標喹賽多，使藥物比活度達到22.5mCi/g，置于自然環(huán)境中用薄膜覆蓋(廄肥)，另一份

11、相同樣品與土壤1:1混合，并種植小白菜，每天多點采集廄肥、土壤和植物，混勻后取樣檢測。結(jié)果表明，喹賽多在環(huán)境中會轉(zhuǎn)化成脫一氧和脫二氧產(chǎn)物，隨著時間的延長，廄肥中喹賽多及其代謝物降解較快，且6天以后已經(jīng)檢測不到任何代謝產(chǎn)物；其中脫二氧喹賽多殘留時間最長，可以存在6天，其消除半衰期為1.49天。而土壤中原形、脫一氧和脫二氧喹賽多存在時間均較短，3天之后已經(jīng)檢測不到任何代謝產(chǎn)物，因此我們推斷喹賽多及其代謝物在環(huán)境中降解迅速，具有良好的環(huán)境安全

12、性。
　　 健康肉雞3只，按照飼料添加400mg/kg，將每只雞每天藥物攝入量換算成一次性灌胃藥量，按照藥物放射性比活度26.25mCi/g，收集前3天的糞便。混勻后分成兩份，一份置于自然環(huán)境中用薄膜覆蓋(廄肥)，另一份按1:4比例與土壤充分混合，種植小白菜，隔天澆水。每天多點采集廄肥、土壤和植物，混勻后取樣檢測。結(jié)果表明，廄肥初期僅檢測到原形、Cy2和Cy6，而且消除較快，隨著時間的延長，有新的降解產(chǎn)物Cy1的生成，推斷原因可

13、能是首先由原形或Cy2轉(zhuǎn)化生成，但其消除速度也較快，5天時已經(jīng)消除完全。而Cy6在廄肥中含量最高，且殘留時間最長，計算其在廄肥中的消除速率常數(shù)為0.244d-，消除半衰期分別為2.84d，降解速度較快，到7天時已經(jīng)降低到檢測限以下。由于本身糞便中各化合物的濃度較低，因此與土壤混合后，土壤中沒有檢測到任何化合物的存在，植物中也沒有檢測到任何相關(guān)的物質(zhì)。所以喹賽多經(jīng)雞體代謝產(chǎn)生的排泄物也不會在環(huán)境造成蓄積，不會對土壤和植物產(chǎn)生危害作用。

14、r>　　 綜上所述，本課題首次建立了喹賽多及其主要代謝物在豬、雞和魚可食性組織的殘留檢測方法，并開展了喹賽多在豬、雞和魚的殘留消除試驗，闡明了喹賽多在三種動物體內(nèi)的殘留消除規(guī)律，進一步確證了喹賽多在食品動物的殘留靶組織與殘留標志物，提出了休藥期標準，并闡明了喹賽多在環(huán)境中的降解規(guī)律。研究成果為喹賽多的食品安全性評價與提供了可靠的技術(shù)資料，為喹賽多的食品殘留監(jiān)控提供了科學(xué)的技術(shù)標準與方法，同時為全面評價喹賽多的食品安全性和環(huán)境安全性提供