1、通過白斑癥病毒(WSSV)與對蝦血細胞膜的體外結合方法和對蝦血細胞原代培養(yǎng)的方法，從研制出的抗對蝦血細胞的單克隆抗體中，篩選出抗WSSV受體的單克隆抗體，并用Westernblot和親和層析方法鑒定了WSSV受體的分子量。實驗結果如下：利用WSSV和對蝦血細胞膜體外結合的DOTBLOT方法，從抗中國對蝦血細胞的單克隆抗體中篩選出單克隆抗體4D8具有部分封閉WSSV和對蝦血細胞膜結合的作用。對蝦血細胞膜和有部分封閉作用的單克隆抗體4D8反

2、應，再和地高辛標記的WSSV(WSSV-DIG)孵育，由于部分受體被封閉使WSSV-DIG無法與其結合，由DOTBLOT得到的結果顏色較淺；對蝦血細胞膜和無封閉作用的單克隆抗體反應，再和WSSV-DIG孵育，由于WSSV-DIG與對蝦血細胞膜上的所有受體結合，由DOTBLOT得到的結果顏色較深。 利用WSSV和對蝦血細胞膜體外結合的ELISA方法，對單克隆抗體4D8的封閉效果進行了定量分析。對蝦血細胞膜和無封閉作用的單克隆抗體反

3、應，再和WSSV-DIG孵育，由于WSSV-DIG與對蝦血細胞膜上的所有受體結合，由ELISA得到的OD值較大，為0.423；對蝦血細胞膜和有封閉作用的單克隆抗體4D8反應，再和WSSV-DIG孵育，由于部分受體被封閉使WSSV-DIG無法與其結合，由ELISA得到的OD值較小，為0.256，占受體不被封閉所得OD值的41％。 用對蝦血細胞原代培養(yǎng)的方法對單克隆抗體4D8的封閉效果進一步驗證：與無封閉作用的單克隆抗體孵育的原代培

4、養(yǎng)的血細胞，經WSSV感染后，第3天就表現(xiàn)出了病理變化；與有封閉作用的單克隆抗體4D8孵育的原代培養(yǎng)的血細胞，經WSSV感染后，出現(xiàn)病理變化較晚，第5天才表現(xiàn)出了病理變化。實驗結果表明：單克隆抗體4D8能封閉部分WSSV受體，從而延緩了WSSV對原代培養(yǎng)血細胞的感染進程。 經Westernblot和親和層析技術鑒定，抗WSSV受體的單克隆抗體4D8在中國對蝦血細胞膜上識別的WSSV受體的分子量為175kDa。單克隆抗體4D8在日

5、本對蝦血細胞上識別的抗原決定簇分子量為175kDa，在凡納濱對蝦血細胞上識別的抗原決定簇分子量為200kDa，在克氏原螯蝦血細胞上識別的抗原決定簇分子量為200kDa。 抗大顆粒細胞的單克隆抗體1B4與WSSV感染的對蝦血細胞反應并經過蘇木精溶液襯染后，通過顯微鏡觀察統(tǒng)計每個視野的細胞數(shù)量：在感染的第1、2、3天，WSSV感染組凡納濱對蝦的血細胞總數(shù)呈逐漸上升的趨勢，大顆粒細胞占血細胞總數(shù)的比例增加較大。在隨后的幾天，血細胞總數(shù)

6、顯著下降；大顆粒細胞的數(shù)量也呈下降的趨勢；大顆粒細胞占血細胞總數(shù)的比例，從第3天的45.9％下降到第8天的43.3％，但仍明顯高于第1天的15.2％。 通過免疫熒光檢測技術，抗凡納濱對蝦三類血細胞的單克隆抗體1B4與凡納濱對蝦胚胎的冰凍切片反應：早期的胚胎呈現(xiàn)出點點的明亮熒光，說明凡納濱對蝦在胚胎發(fā)育期就已有了成蝦血細胞的組分。用抗凡納濱對蝦大顆粒細胞的單克隆抗體1H11檢測胚胎和無節(jié)幼體各期的冰凍切片，發(fā)現(xiàn)從蚤狀幼體Ⅲ期才開始