1、狂犬病是由狂犬病病毒(rabies virus，RV)引發(fā)的一種人獸共患傳染病，幾乎感染所有的溫血動物和人，能引起急性致死性腦脊髓炎，一旦發(fā)病，病死率幾乎100％，是迄今為止，病死率最高的急性傳染病，已經(jīng)成為嚴重危害公共衛(wèi)生的重大疫病。目前，尚無有效的藥物和方法治療狂犬病，主要以免疫為主，免疫后能否產(chǎn)生有效的保護抗體，建立一種行之有效的狂犬病抗體檢測方法進行檢測十分重要，另外也可以通過抗體檢測進行狂犬病診斷和疫苗評估。
　　 為

2、構建具有凝集性、免疫反應性的雙功能融合蛋白，本試驗設計出兩對特異性引物，從重組質(zhì)粒pMD-G和pMD-2E8ScFv中分別擴增出Kg基因和2E8基因，通過SOE-PCR方法法拼接成融合基因2E8Kg，進一步構建原核表達質(zhì)粒pET-Trx-2E8Kg，后轉(zhuǎn)入BL21(DE3)plysS中誘導表達。SDS-PAGE分析表明，2E8Kg融合基因獲得了高效表達并主要以包涵體形式存在，表達量占菌體總蛋白的23.5％左右，分子量約為77.7 kD，

3、與預期大小一致。將表達的蛋白以親和層析法進行純化并通過谷胱甘肽還原法進行復性，純化后蛋白純度達到98.9％。經(jīng)Western-blot檢測和紅細胞凝集試驗證明，2E8Kg融合蛋白既能夠與狂犬病毒(RV)高免血清發(fā)生特異性反應，又能夠與人紅細胞結合，具有雙功能特性。
　　 以此雙功能融合蛋白為檢測抗原，以人‘0’型紅細胞作為指示細胞，建立了快速檢測狂犬病毒G抗體的方法。通過方陣滴定試驗篩選出檢測抗原最佳稀釋度為1:16，對應的工作

4、濃度為106.26μg/mL，血清最佳稀釋度為1:16，作用時間25 min。利用該方法檢測犬細小病毒(CPV)、犬瘟熱病毒(CDV)陽性血清均無凝集，與RV標準陽性血清反應出現(xiàn)強凝集，表明該方法特異性強。用不同批次制備的檢測抗原重復檢測狂犬病毒陽、陰性標準血清，檢測結果完全一致，具有很好的重復性。將紅細胞凝集試驗與熒光抗體病毒中和試驗(FAVNT)作平行比對，通過對臨床1086份犬血清的檢測，結果發(fā)現(xiàn)血凝價大于或等于1:16(相當于F