1、水生動(dòng)物病害的防治問(wèn)題一直是人們關(guān)注的重點(diǎn)，但目前很少有特效的藥物能對(duì)抗水生動(dòng)物病害，抗菌肽的出現(xiàn)給此類問(wèn)題帶來(lái)了新的突破。組蛋白H2B及其衍生的抗菌肽HLPs在魚(yú)類免疫、抗菌方面的研究已越來(lái)越被人們關(guān)注，此類研究在對(duì)水生動(dòng)物自身免疫及疾病防治方面具有廣闊的應(yīng)用前景，本研究旨在對(duì)組蛋白H2B及其衍生的抗菌肽HLP一1的序列特征進(jìn)行分析，為進(jìn)一步從分子水平上闡明組蛋白H2B及其衍生的抗菌肽HLP-1的來(lái)源及抑菌機(jī)制奠定基礎(chǔ)，另外，原核誘導(dǎo)

2、表達(dá)的研究也對(duì)抗菌肽的生產(chǎn)提供了參考，為組蛋白類抗菌肽的抑菌活性研究及較高抗菌活性的抗菌肽篩選提供了研究基礎(chǔ)。
　　本研究根據(jù)GenBanK中的斑馬魚(yú)(Danio rerio)等魚(yú)類H2B基因保守性序列設(shè)計(jì)引物，從鳙魚(yú)(Aristichthys nobilis)、草魚(yú)(Ctenopharyngodon idellus)、鯉魚(yú)(Cyprinuscarpio)、鯽魚(yú)(Carassius auratus)四種魚(yú)肌肉中擴(kuò)增出組蛋白H2B基

3、因(全長(zhǎng)375bp)，并分別構(gòu)建了不同魚(yú)類組蛋白H2B基因的質(zhì)粒載體，克隆載體，獲得組蛋白H2B基因序列。利用DNAMAN軟件進(jìn)行了核酸序列相似性比對(duì)，結(jié)果顯示其同源性高達(dá)90％以上。通過(guò)在線分析軟件分析了其編碼的不同蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)、分子量、二級(jí)結(jié)構(gòu)和三級(jí)結(jié)構(gòu)等相關(guān)分析。結(jié)果顯示：H2B編碼的蛋白質(zhì)分子量在10 KDa到15 KDa之間：二級(jí)結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)顯示，組蛋白H2B主要由α螺旋和無(wú)規(guī)卷曲結(jié)構(gòu)組成；三級(jí)結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)顯示組蛋白H2B含有豐富的

4、α螺旋結(jié)構(gòu)，含量在50％以上。
　　本實(shí)驗(yàn)通過(guò)目的基因及載體PET-32a(+)的雙酶切構(gòu)建了表達(dá)載體，并成功轉(zhuǎn)化至大腸桿菌BL-21(DE3)感受態(tài)細(xì)胞中，經(jīng)IPTG誘導(dǎo)，通過(guò)SDS-PAGE電泳，結(jié)果表明鯽魚(yú)、鯉魚(yú)H2B基因在原核細(xì)胞大腸桿菌BL-21(DE3)中成功表達(dá)。
　　基于鳙魚(yú)、草魚(yú)、鯉魚(yú)和鯽魚(yú)H2B基因，設(shè)計(jì)引物，擴(kuò)增組蛋白H2B衍生的抗菌肽HLP-1基因，通過(guò)相關(guān)在線網(wǎng)站及相關(guān)軟件對(duì)推導(dǎo)的抗菌肽HLP-1進(jìn)

5、行了蛋白質(zhì)基本特性分析，結(jié)果顯示：分子量在2 KDa左右，含大量陽(yáng)離子，帶正電性；二級(jí)結(jié)構(gòu)顯示其蛋白由無(wú)規(guī)卷曲和α螺旋結(jié)構(gòu)組成；三級(jí)結(jié)構(gòu)顯示抗菌肽HLP-1位于組蛋白H2B的氨基端。
　　進(jìn)行目的基因和載體PET-32a(+)的雙酶切，然后連接，成功轉(zhuǎn)入感受態(tài)細(xì)胞BL-21(DE3)中，經(jīng)IPTG誘導(dǎo)，通過(guò)SDS-PAGE電泳檢測(cè)，表明了草魚(yú)HLP-1基因成功進(jìn)行了原核表達(dá)。
　　本研究成功克隆了組蛋白H2B基因及其衍生的抗