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![毛木耳油疤病病菌致病因子產(chǎn)生條件與基本特性研究.pdf_第1頁](https://static.zsdocx.com/FlexPaper/FileRoot/2019-3/1/8/4c88b1e5-7303-412a-a7df-296a8dcfae7d/4c88b1e5-7303-412a-a7df-296a8dcfae7d1.gif)
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文檔簡介
1、毛木耳(Auricularia polytricha)是一種具有重要營養(yǎng)價值和保健功能的食用真菌,在我國四川、福建等地廣泛栽培。毛木耳油疤病是由子囊菌木棲柱孢霉(Scytalidium lignicola)引起的一種菌絲體侵染性病害。在前期研究中首次發(fā)現(xiàn)木棲柱孢霉對毛木耳菌絲體具有較強的寄主專一性。為探索木棲柱孢霉專一性侵染毛木耳菌絲體的致病機制,本文分析了木棲柱孢霉在不同培養(yǎng)基質(zhì)上對毛木耳菌絲體的致病性、木棲柱孢霉酶類致病因子的初步探
2、索以及毒素類致病因子的產(chǎn)生條件與基本特性,并對毒素類致病因子的分離純化方法進行了摸索。
本研究主要內(nèi)容包括:⑴研究了毛木耳油疤病在不同培養(yǎng)條件下的癥狀表現(xiàn)。在裝滿培養(yǎng)料的菌袋兩端分別接種毛木耳和木棲柱孢霉菌絲,菌袋中的毛木耳菌絲會被木棲柱孢霉感染而出現(xiàn)油疤病病斑。而在木屑平板培養(yǎng)料上,當兩者接觸后,培養(yǎng)皿的正面和背面均未出現(xiàn)油疤病病斑,但接觸后的毛木耳菌絲出現(xiàn)變色發(fā)黃的癥狀;在雙頭試管培養(yǎng)料中,能觀察到兩者的接觸部分出現(xiàn)油疤病
3、病斑;在三角瓶培養(yǎng)料中,當兩者接觸后,貼三角瓶壁的部分能觀察到油疤病病斑,三角瓶上面部分則僅出現(xiàn)菌絲變色發(fā)黃的癥狀。⑵研究了病原菌培養(yǎng)液對毛木耳及其它食用菌的抑制作用。隨著培養(yǎng)基中木棲柱孢霉?jié)饪s培養(yǎng)液量的增加,對毛木耳菌絲體的抑制作用增強,當添加量為總體積的50%時,能完全抑制毛木耳菌絲的生長。同時,其對平菇、香菇、黑木耳、秀珍菇的菌絲體也有較強的抑制能力,對其它食用菌菌絲體的生長抑制能力則較弱,對猴頭菇菌絲體的生長有促進作用。⑶病原菌
4、蛋白質(zhì)類致病因子分析。病斑處和病原菌菌絲生長部位的水提取液對毛木耳菌絲生長具有明顯的抑制作用,且水提取液滅菌后失去抑菌活性。⑷病原菌毒素類致病因子分析。在液體培養(yǎng)條件下,CYM培養(yǎng)液中致病因子產(chǎn)量最高,最佳培養(yǎng)時間是8天,需持續(xù)振蕩,在初始pH4~9范圍內(nèi)致病因子的產(chǎn)生不受pH值變化的影響,最佳碳源和氮源分別為葡萄糖和蛋白胨。致病因子的活性不受蛋白酶K的影響,具有較強的紫外光穩(wěn)定性和熱穩(wěn)定性,在pH2~10范圍內(nèi)活性不受pH值變化的影響
5、,此外,致病因子的分子量小于1000、在氯仿中溶解性最好,推測致病因子中包括毒素類物質(zhì)。⑸使用葡聚糖凝膠柱層析、陰離子交換樹脂、陽離子交換樹脂和硅膠柱層析分離毒素,均未能將毒素較好地分離開。將木棲柱孢霉毒素培養(yǎng)液的氯仿萃取物經(jīng)過制備板薄層層析分離,得到活性組分的存在部位,繼續(xù)通過制備板薄層層析分離,得到的再分離物中Rf=0和Rf=0.08條帶處的組分對毛木耳生長的抑制作用最強,分別達到69.8%和63.5%。通過HPLC檢驗,發(fā)現(xiàn)Rf=
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