1、獼猴桃(Actinidia)原產(chǎn)于中國(guó)是一種非常珍貴的果樹(shù)資源，在中國(guó)廣大地區(qū)都有分布。由于獼猴桃適應(yīng)性強(qiáng)，繁殖容易，對(duì)土壤的酸堿度等條件要求不嚴(yán)，一年種植多年受益，加之其經(jīng)濟(jì)價(jià)值較高、風(fēng)味獨(dú)特、用途廣泛，特別是維生素C含量非常豐富，享有“果中之王”之美譽(yù)，因而被廣泛種植。近年來(lái)，由于獼猴桃種植面積迅速擴(kuò)大，獼猴桃細(xì)菌性潰瘍病(Kiwifruit bacterial canker)傳播迅速，病害威脅日益增加，危害程度日趨嚴(yán)重。獼猴桃潰瘍

2、病是一種由丁香假單孢桿菌獼猴桃致病種(Pseudomonas syringae pv.actinidae)引起的毀滅性病害，此病先后在日本、美國(guó)、韓國(guó)及意大利等國(guó)相繼被發(fā)現(xiàn)。最近，在法國(guó)、葡萄牙、西班牙、瑞士、新西蘭及智利等也了有相關(guān)報(bào)道。在我國(guó)，首先在湖南、安徽、陜西、四川等地區(qū)發(fā)現(xiàn)了此病，現(xiàn)已擴(kuò)展到獼猴桃多數(shù)主產(chǎn)區(qū)，造成的經(jīng)濟(jì)損失慘重。
　　 本試驗(yàn)通過(guò)對(duì)中國(guó)不同區(qū)域獼猴桃潰瘍病發(fā)病植株的枝條、葉片進(jìn)行采集、對(duì)潰瘍病病原菌進(jìn)

3、行分離和培養(yǎng)純化，利用16S rDNA和16S-23S rDNA間隔區(qū)序列(ITS)對(duì)細(xì)菌近緣種(related species)、致病品種(pathogenic variety)和菌株(strain)的區(qū)分和相關(guān)分子技術(shù)進(jìn)行克隆測(cè)序，確定該菌為獼猴桃潰瘍病病菌后，通過(guò)接種篩選相關(guān)獼猴桃抗病種質(zhì)資源，為新品種選育和抗性資源的利用提供理論依據(jù)。
　　 研究主要結(jié)果如下：
　　 l、根據(jù)我們從安徽省岳西縣、陜西省戶縣及重慶市

4、黔江等獼猴桃主產(chǎn)區(qū)的調(diào)查發(fā)現(xiàn)，獼猴桃潰瘍病主要為害獼猴桃的主干、枝蔓和葉片。在枝干上病部初期有乳白色的菌膿大量溢出、后變成紅褐色的粘液附著在病斑表面，隨后病斑上部枝條萎蔫死亡。在葉片上則表現(xiàn)為中間病斑深褐色、邊緣有不規(guī)則的黃色近圓形病斑。
　　 2、從產(chǎn)區(qū)收集到的潰瘍病感染枝條和樹(shù)皮中共分離純化得到10株分離物：SXQM、SXHWD、A18、A17、C33、SXHY、AKA5、AKB5、AK14、AK18。所有分離物均可使煙草葉

5、片產(chǎn)生過(guò)敏反應(yīng)，使獼猴桃品種健康葉片致病。獼猴桃葉片接種顯示同一菌株對(duì)不同品種及不同菌株對(duì)同一品種的致病力均存在差異。
　　 3、將分離得到的菌株用16S rDNA和16S-23S rDNA間隔區(qū)序列(ITS)進(jìn)行分子鑒定。以分離物和意大利對(duì)照菌株的菌液做為模板，應(yīng)用16S rDNA通用引物和特異引物PsaF1、PsaR2進(jìn)行PCR擴(kuò)增，均獲得片段長(zhǎng)度約1500 bp和300 bp的目的條帶。將不同菌株P(guān)CR產(chǎn)物分別回收純化，經(jīng)

6、測(cè)序分析發(fā)現(xiàn)，10株致病菌的DNA片段大小一致，均為1448bp和280bp，且序列相同。由此可見(jiàn)，所分離純化的10株菌為同一致病菌。
　　 4、將16S rDNA的序列Blast比對(duì)、分析結(jié)果顯示，該序列與丁香假單孢桿菌獼猴桃致病變種已報(bào)道的菌株GQ914994、AB001439、EU906856及AJ889840序列一致。通過(guò)將16S-23S rDNA的序列Blast比對(duì)、分析結(jié)果顯示該序列也與丁香假單孢桿菌獼猴桃致病變種已

7、報(bào)道的菌株JN172920.1、HM032088.1、D86357.1及AY342165.1等的16S-23S rDNA ITS序列一致。
　　 5、構(gòu)建進(jìn)化樹(shù)，將分離物與丁香假單孢桿菌獼猴桃致病變種相近的物種進(jìn)行聚類，16SrDNA聚類結(jié)果發(fā)現(xiàn)GQ914994、AB001439、EU906856及AJ889840菌株的親緣關(guān)系最近，16S-23S rDNA結(jié)果發(fā)現(xiàn)JN172920.1、HM032088.1、D86357.1及A