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![盾葉薯蕷胚乳培養(yǎng)再生植株及其倍性鑒定.pdf_第1頁](https://static.zsdocx.com/FlexPaper/FileRoot/2019-3/1/9/91abbc19-ccf3-4445-9cd8-448f34e0201e/91abbc19-ccf3-4445-9cd8-448f34e0201e1.gif)
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文檔簡介
1、盾葉薯蕷(Dioscorea Zingiberensis C.H.Wright)是薯蕷科薯蕷屬多年生草本植物,以干燥根莖入藥,是一種極為重要的藥用植物。主要藥用成分是薯蕷皂苷元(disogenin),具有降血脂、抗衰老、抗腫瘤、消炎、保肝等多種功效,被醫(yī)藥界稱為“藥用黃金”。但盾葉薯蕷在采挖時缺乏科學性和計劃性,造成資源蘊藏量急劇下降。在繁殖時由于選用的是根莖存在繁殖率低、生長緩慢、品質退化等問題。因此,針對這些問題,我們對盾葉薯蕷的胚
2、乳進行培養(yǎng)并對三倍體再生植株的鑒定方法及快繁技術體系進行了系統(tǒng)的研究。獲得了以下研究成果:
1.篩選出了胚乳愈傷組織誘導與繼代增殖的適宜培養(yǎng)基。適宜胚乳愈傷組織誘導的培養(yǎng)基是MS+2,4-D2.0 mg/L+6-BA0.5 mg/L,72天后可形成淡黃色疏松愈傷組織;適宜胚乳愈傷組織繼代增殖的培養(yǎng)基是MS+NAA1.0 mg/L,愈傷組織的生長速率為1.16 g/(L·d),30天后愈傷組織的增殖量為34.73 g/L,是初始
3、接種量(12.5 g/L)的2.8倍。
2.研究了胚乳愈傷組織形成再生植株的途徑和適宜培養(yǎng)基。通過正交實驗,胚乳愈傷組織在不同分化培養(yǎng)基上經過180天的培養(yǎng)可通過兩條途徑分化成苗,一種是不定芽途徑,一種是類原球莖途徑。適宜分化出不定芽的培養(yǎng)基為MS+6-BA2.0 mg/L+NAA0.1 mg/L,分化率為57.06%;適宜分化出類原球莖的培養(yǎng)基為MS+6-BA3.0 mg/L+NAA0.2 mg/L+KT0.5 mg/L,分
4、化率為72.25%。
3.盾葉薯蕷胚乳培養(yǎng)再生植株的倍性鑒定。(1)染色體數目鑒定。以腋芽生長點為試驗材料,采用常規(guī)染色體制片的方法,結果表明:胚乳培養(yǎng)再生植株染色體數在20-30之間,其中染色體數為30(2n=3x=30)的細胞占觀察細胞總數的74%,染色體數目在20-30之間的細胞占觀察細胞總數的16%,染色體數目為20(2n=2x=20)的細胞,占觀察細胞總數的10%;染色體數目為20的再生植株占觀察植株的10%,染色體
5、數目在20-30之間的再生植株占觀察植株的50%,染色體數為30的再生植株占觀察植株的40%,獲得了三倍體植株。(2)形態(tài)學鑒定。三倍體與二倍體試管苗相比植株較矮、莖加粗、葉片較大且變厚、葉色加深。三倍體株高比二倍體減少了23.02%且兩者之間具有極顯著性差異,三倍體莖粗、最大葉長、葉寬和葉厚極顯著高于二倍體,分別增加了77.08%、48.06%、46.53%、29.82%。(3)細胞學鑒定。三倍體氣孔密度極顯著低于二倍體,減少率為64
6、.98%;單個保衛(wèi)細胞中葉綠體數目三倍體極顯著的高于二倍體,增加率為115.25%。三倍體的氣孔器長、寬以及氣孔長、寬都要高于二倍體,增加率分別為:25.98%、4.11%、26.32%、4.11%,且兩者之間的氣孔長和保衛(wèi)細胞長具有極顯著性差異,氣孔寬和氣孔器寬不具有差異性。(4)生理生化鑒定。三倍體與二倍體相比葉綠素b含量和類胡蘿卜素含量均達到顯著水平,其中,三倍體中葉綠素b的含量與二倍體相比,平均增加60.71%,類胡蘿卜素的含量
7、平均增加9.1%,兩者葉綠素a的含量未達到顯著水平,三倍體與二倍體相比平均增加了13.63%;可溶性糖含量、可溶性蛋白含量和POD含量,三倍體與二倍體之間均達到顯著水平,SOD含量則達到極顯著水平,其中可溶性糖含量平均增加18.67%,可溶性蛋白含量平均增加8.31%,POD含量平均增加50%,SOD含量平均增加17.3%。(5)同工酶鑒定。利用SOD和POD兩種同工酶鑒定再生植株,在SOD酶譜中,三倍體有3條譜帶,二倍體有2條譜帶,兩
8、者之間有1條相同譜帶;在POD酶譜中,三倍體有4條譜帶,二倍體有2條譜帶,兩者之間有2條相同譜帶,且三倍體中譜帶的顏色要深于二倍體。
4.建立了盾葉薯蕷三倍體植株快繁技術體系。適宜于三倍體試管苗快繁的培養(yǎng)基為MS+6-BA2.0mg/L+KT1.0 mg/L+NAA0.1 mg/L,繁殖周期為30天,繁殖系數高達4.75;適于生根的培養(yǎng)基為1/2 MS+NAA0.3 mg/L,生根率為90%。生根苗經過一個月的煉苗管理后,移栽
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