1、單位代碼：學(xué)號：100862009076和BvGLPl轉(zhuǎn)抗病性鑒定MolecularDetectionandIdentificationofGmPGIP3andBvGLPlTransgenicWheatwithEnhanceddiseaseresistance學(xué)位申請人：指導(dǎo)教師：學(xué)科專業(yè)：學(xué)位類別：授予單位：答辯日期：黨良邵艷軍副教授張增艷研究員發(fā)育生物學(xué)理學(xué)碩士河北農(nóng)業(yè)大學(xué)二。一二年五月二十九日摘要GmPGIP3是大豆多聚半乳糖醛酸

2、酶抑制蛋白3，能夠抑制一些真菌內(nèi)切多聚半乳糖醛酸活性，從而減弱真菌對植株的侵害。BvGLPl是甜菜中的一類萌發(fā)素蛋白，萌發(fā)素催化草酸氧化產(chǎn)生過氧化氫，過氧化氫能夠誘導(dǎo)與抗性有關(guān)的基因表達(dá)，從而使植物產(chǎn)生相關(guān)抗性。本研究利用基因工程技術(shù)構(gòu)建了GmPGIP3和BvGLPl基因的單子葉植物表達(dá)載體pA25GmPGIP3和pA20BvGLPl，通過基因槍介導(dǎo)法將其轉(zhuǎn)入推廣的小麥品種揚麥18和揚麥19中，成功的獲得了轉(zhuǎn)基因小麥植株。經(jīng)過多代的鑒定

3、和選育，最終挑選出了抗小麥紋枯病、赤霉病和根腐病的小麥新種質(zhì)，主要研究工作如下：1抗小麥紋枯病揚麥19種質(zhì)的獲得。對轉(zhuǎn)GmPGIP3基因揚麥19的To至T4代植株，進行PCR、Southernblot、半定量RTPCR、熒光定量QRTPCR分析，人工接種致病菌禾谷絲核菌后進行抗性鑒定。分子檢測結(jié)果表明，GmPGIP3已轉(zhuǎn)入揚麥19，已驗證在部分轉(zhuǎn)基因小麥不同株系中以一至二個拷貝存在，并在轉(zhuǎn)錄水平上表達(dá)；不同轉(zhuǎn)基因株系的抗病性對比受體材料

4、有明顯提高而且可以穩(wěn)定遺傳。同時調(diào)查主要農(nóng)藝性狀與受體材料沒有明顯差異，說明外源基因?qū)π←溦ＩL基本沒有影響。2抗小麥赤霉病揚麥19種質(zhì)的獲得。對轉(zhuǎn)GmPGIP3基因揚麥19的To至T4代植株，進行上述分子檢測，在江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院生物技術(shù)研究所網(wǎng)室內(nèi)，采用人工接種致病菌禾谷鐮刀菌后進行抗性鑒定。分子檢測結(jié)果表明，GmPGIP3已轉(zhuǎn)入揚麥19，已驗證在部分轉(zhuǎn)基因小麥不同株系中以一至二個拷貝存在，并在轉(zhuǎn)錄水平上表達(dá)；不同轉(zhuǎn)基因株系的抗病性

5、對比受體材料有明顯提高而且可以穩(wěn)定遺傳。3抗小麥根腐病揚麥18種質(zhì)的獲得。對轉(zhuǎn)GmPGIP3和BvGLP—J7基因揚麥18的To至T2代植株進行上述分子檢測，人工接種混合致病菌后進行抗性鑒定。分子檢測結(jié)果表明，GmPGIP3和BvGLP1已分別轉(zhuǎn)入不同株系的揚麥18。已驗證在部分轉(zhuǎn)基因小麥不同株系中以一至二個拷貝存在，并在轉(zhuǎn)錄水平上表達(dá)；不同轉(zhuǎn)基因株系的抗病性對比受體材料有明顯提高而且可以穩(wěn)定遺傳。同時調(diào)查主要農(nóng)藝性狀與受體材料沒有明顯