1、胃蛋白酶原(Pepsinogen，PG)是胃蛋白酶的前體,在胃酸作用下能夠激活成為活性形式的胃蛋白酶。本實(shí)驗(yàn)室前期獲得了鱖(Siniperca chuatsi)三種胃蛋白酶原 PG A1、PG A2和PG C cDNA全長(zhǎng)序列,為進(jìn)一步了解鱖胃蛋白酶原早期發(fā)育表達(dá)特征,論文采用熒光定量 PCR技術(shù)檢測(cè)了鱖孵化后0-22天(days post hatching，dph)胃蛋白酶原 mRNA表達(dá)水平變化,結(jié)果表明,3種胃蛋白酶原 mRNA表

2、達(dá)均始于8 dph,之后表達(dá)量都呈上升趨勢(shì),PG A1表達(dá)量最高,其次是 PG A2,PG C表達(dá)量最低。它們的表達(dá)各具特點(diǎn),其中,PG A2在16-22 dph表達(dá)量比較平穩(wěn)。三種胃蛋白酶原 mRNA的表達(dá)時(shí)間都早于胃腺的出現(xiàn)時(shí)間(13-14 dph),推測(cè)13 dph以前觀察到的胃蛋白酶原 mRNA表達(dá)可能并不是由胃腺表達(dá)的,而是由其它組織表達(dá)的。
　　胃蛋白酶作為胃蛋白酶原的活性形式,是消化道中的重要消化酶,是胃內(nèi)酸性消化的

3、執(zhí)行者,對(duì)食物蛋白質(zhì)的初步消化起重要作用,胃蛋白酶活性的大小反映了胃的消化能力。在鱖早期發(fā)育階段,胃組織尚未分化發(fā)育,此時(shí)仔魚(yú)消化主要是依靠胞飲作用進(jìn)行胞內(nèi)消化,以及堿性消化作用。隨著消化系統(tǒng)的發(fā)育,出現(xiàn)了胃和胃腺,胃腺分泌胃蛋白酶原,胃蛋白酶原在胃酸作用下形成活性形式的胃蛋白酶,仔魚(yú)消化方式由堿性消化轉(zhuǎn)變?yōu)橄纼?nèi)更有效的酸性消化。本研究檢測(cè)了鱖孵化后0-22天胃蛋白酶樣活性大小變化,結(jié)果顯示酶樣活性呈現(xiàn)較大的波動(dòng),在早期(0-8 d

4、ph)就有檢測(cè)到較低水平的活性,而此時(shí)胃腺尚未出現(xiàn),胃蛋白酶原基因也未表達(dá),這一時(shí)期的胃蛋白酶樣活性可能是由母源性的胃蛋白酶或其它天冬氨酸蛋白酶所致。8 dph后胃蛋白酶樣活性迅速上升,這與胃蛋白酶原 mRNA水平的表達(dá)特征一致。
　　胃蛋白酶分泌受多種胃腸激素影響,胃泌素(gastrin，GAS)與膽囊收縮素(cholecystokinin，CCK)對(duì)胃蛋白酶原分泌都有一定的調(diào)控作用,GAS主要刺激胃酸分泌,CCK主要促進(jìn)膽囊排

5、空及胰液分泌,魚(yú)類(lèi)中尚缺乏 GAS、CCK的功能系統(tǒng)研究。論文采用RACE技術(shù)克隆了鱖胃泌素與膽囊收縮素基因 cDNA序列,GAS基因 cDNA全長(zhǎng)581bp,5’非翻譯區(qū)100 bp,3’非翻譯區(qū)145 bp,開(kāi)放閱讀框336bp,編碼111個(gè)氨基酸;CCK具有2種類(lèi)型:CCK1與 CCK2,CCK1 cDNA全長(zhǎng)為843bp,5’非翻譯區(qū)60 bp,3’非翻譯區(qū)369 bp,開(kāi)放閱讀框414bp,編碼137個(gè)氨基酸;CCK2 cDN

6、A全長(zhǎng)846bp,5’非翻譯區(qū)112bp,3’非翻譯區(qū)332bp,開(kāi)放閱讀框403bp,編碼134個(gè)氨基酸。GAS與 CCK成熟肽 C末端具有相似的八肽結(jié)構(gòu)(DYQGWVDF/DYLGWMDF),僅在 C末端第3位和第6位氨基酸發(fā)生替換。熒光定量 PCR分析表明，GAS mRNA主要表達(dá)于腸和幽門(mén)垂,CCK1與 CCK2 mRNA在腦中表達(dá)量最高,在腸和幽門(mén)垂也有較高表達(dá),表明 GAS與 CCK同為消化調(diào)控因子,而 CCK還是重要神經(jīng)分