1、以磁珠為載體的電化學免疫傳感技術是當前的一個研究熱點。如何有效地將攜帶了大量檢測信息的磁珠固定在工作電極的檢測表面,并對其進行直接電化學測定是制約該技術發(fā)展的一個關鍵性問題。使用磁性工作電極可有效解決此困難。本論文將圍繞磁性工作電極的制作,基于納米信號放大的以磁珠為載體的電化學免疫檢測新方法的構建及其在動物疾病診斷中的應用,開展以下幾方面的工作:
　　(1)磁性工作電極的制作
　　分別建立了磁性金工作電極和磁性玻碳電極的制作

2、方法,且制作方法簡單、易行,成本低廉,易于推廣。此外,對磁性工作電極的性能進行了測試,結果表明,它們能有效捕獲磁珠進行直接電化學測定,為構建以磁珠為載體的電化學免疫分析新方法奠定了基礎。
　　(2)基于碳納米管摻雜以磁珠為載體的電化學免疫新方法在日本乙型腦炎病毒檢測中的應用
　　以磁珠為載體,摻雜碳納米管構建了一種新的電化學免疫分析方法,并將其應用于日本乙型腦炎病毒的檢測中。選用金磁納米粒子為載體,辣根過氧化物酶為示蹤標記物

3、。免疫反應后,摻雜碳納米管。利用磁性金工作電極將碳納米管摻雜的金磁復合物捕獲到電極檢測表面上進行電化學測定。摻雜碳納米管可有效改善電極表面的導電性,得到高靈敏的檢測結果。采用日本乙型腦炎病毒作為目標分析物。在最佳檢測條件下,日本乙型腦炎病毒的檢測限為2.0×103PFU/mL,比膠體金免疫試紙條法低兩個數(shù)量級,與 RT-PCR法的基本類似。分別用本方法和RT-PCR法分析60份臨床樣品,結果顯示本方法與RT-PCR法的符合率高達95％,

4、表明本方法在日本乙型腦炎病毒的臨床診斷中具有較好的應用前景。
　　(3)基于納米金標記的以磁珠為載體的電化學免疫新方法在偽狂犬病毒抗體檢測中的應用
　　采用納米金為電活性探針,構建了一種新的以磁珠為載體的電化學免疫分析方法,并將其應用到偽狂犬病毒抗體的檢測中。選用羧基修飾的磁珠為載體。免疫反應后,利用磁性玻碳電極將磁珠捕獲到電極檢測表面上,采用電化學氧化法使得納米金生成AuCl4-,通過測定AuCl4-的信號對檢測物進行分析

5、。采用偽狂犬病毒抗體作為目標分析物。在最佳檢測條件下,可檢測到稀釋了1:1000的偽狂犬病毒抗體標準陽性血清,其檢測限低于傳統(tǒng)的ELISA檢測法。分別用本方法和ELISA法分析52份豬的血清樣本,結果表明本方法與ELISA法具有很好的符合率。
　　(4)基于納米金催化銀沉積的以磁珠為載體的電化學免疫新方法在豬圓環(huán)病毒2型抗體檢測中的應用，結合納米金催化銀沉積信號放大技術,構建了一種新的以磁珠為載體的電化學免疫分析方法,并將其應用于

6、豬圓環(huán)病毒2型抗體的檢測。選用異硫氰根修飾磁珠為載體,納米金為標記物。免疫反應后,加入銀染液進行銀放大,固定在磁珠表面的納米金可催化溶液中的銀離子以納米金為核進行沉積。利用磁性玻碳電極將磁珠捕獲到電極的檢測表面上,通過測定銀單質的溶出信號對分析物進行檢測。以豬圓環(huán)病毒2型抗體為目標分析物。在最佳檢測條件下,可檢測到稀釋了1:4096的豬圓環(huán)病毒2型抗體標準陽性血清,該檢測限明顯低于傳統(tǒng)的ELISA檢測法。分別用本方法和ELISA法去分析