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文檔簡介
1、高密度集約化養(yǎng)殖成為當下主要的水產養(yǎng)殖方式,帶來較大收益的同時也導致魚類病毒的更大范圍的流行。傳統使用化學消毒劑以及抗生素的魚病防治策略引發(fā)了一系列嚴峻問題。魚用疫苗作為一種經濟高效的水產養(yǎng)殖防治措施漸漸引起大家的關注與重視。鯉魚是我國的主要食用魚種,在我國得到大范圍的養(yǎng)殖,創(chuàng)造了巨大的經濟效益。錦鯉是一種觀賞用的花色鯉魚,體色漂亮,色彩鮮艷,是淡水養(yǎng)殖觀賞魚中的精品,被稱為水中寶石。1998年由以色列開始暴發(fā)的錦鯉皰疹病毒病給食用鯉魚
2、和觀賞錦鯉的養(yǎng)殖造成了極大的危害,該病已在世界范圍內被發(fā)現并造成了嚴重的經濟損失。錦鯉皰疹病毒的全基因組序列已被測定,但是有關該病毒更進一步的信息目前研究的很少。
本文對錦鯉皰疹病毒序列進行生物信息學分析并選取了ORF25,ORF99,ORF115,ORF131,ORF139共五個基因蛋白的部分序列作為保護性抗原,對五個抗原蛋白進行分子克隆和原核細胞的表達與純化。同時本實驗室構建了自己的錦鯉尾鰭細胞細胞株和金魚尾鰭細胞株,用于
3、錦鯉皰疹病毒的增殖。實驗后期對上述五個抗原蛋白進行疫苗保護性評價。本文同時選取了錦鯉皰疹病毒炎癥相關基因可溶性腫瘤壞死因子受體(STNFRs)ORF4,ORF12以及白細胞介素-10(IL-10)ORF134和G蛋白偶聯受體(GPCR) ORF16進行293T細胞pEGFP-C3載體轉染,并利用激光共聚焦手段結合羅丹明標記的鬼筆環(huán)肽F肌動蛋白染色對上面四個炎癥因子基因進行了細胞定位分析,同時對其他的一些相關病毒基因進行了病毒感染宿主細胞
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