麥長管蚜等六種昆蟲OBP3的基因克隆、蛋白表達及麥長管蚜嗅覺相關蛋白鑒定.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、在農業(yè)害蟲及其天敵寄主尋找和定位行為過程中,嗅覺起重要作用。在蚜蟲及其天敵嗅覺分子機制研究領域,蚜蟲報警激素E-β-法呢烯(EβF)是重要研究對象。已有報道豌豆蚜的氣味結合蛋白ApisOBP3對EβF具有特異的親和能力,因此OBP3被認為是蚜蟲感知EβF的氣味結合蛋白。OBP3在蚜蟲中十分保守,也說明該蛋白在蚜蟲的嗅覺感受過程中具有十分重要的生理功能。開展多種蚜蟲及其天敵等昆蟲的EβF感受機制的研究,對了解報警信息素驅避蚜蟲和吸引天敵的

2、作用機理、開發(fā)基于EβF的“推-拉技術”的害蟲綜合治理策略具有重要的理論與應用價值。
   本研究以EβF嗅覺感受為重點,選取具有不同EβF嗅覺行為反應的6種昆蟲麥長管蚜、甘藍蚜、楓長鐮管蚜、異色瓢蟲、黑帶食蚜蠅、長尾管蚜蠅等為實驗對象,利用ApisOBP3的cDNA序列設計引物,檢測麥長管蚜等6種昆蟲體內OBP3基因表達情況;并構建OBP3重組蛋白表達載體,進行蛋白表達:測定楓長鐮管蚜對EβF嗅覺行為反應;對麥長管蚜頭部進行蛋

3、白組學研究,鑒定其嗅覺相關蛋白。取得的主要結果如下:
   1.通過基因克隆、蛋白表達等技術手段及后續(xù)的配體結合實驗,證明能夠識別和結合EβF的OBP3在6個實驗對象體內均有表達,為上述昆蟲對EβF的識別提供了分子生物學依據(jù)。麥長管蚜利用EβF作為報警信息素,雌性黑帶食蚜蠅及異色瓢蟲成蟲利用EβF作為利它素;而OBP3在其他實驗對象中的表達則說明,EβF可能具有其他生理功能,甘藍蚜對EβF不敏感,但其機體內存在識別EβF的機制,

4、可能利用EβF的有無來區(qū)分同類和寄主植物;楓長鐮管蚜不分泌EβF,但具有種內報警信息素:楓長鐮管蚜對于外源EβF的回避可能與遷飛過程中寄主識別及更有效地逃避被捕食等有關;雄性黑帶食蚜蠅及長尾管蚜蠅可能通過EβF(來自于植物或蚜蟲)判斷蜜源,雄性黑帶食蚜蠅對EβF的趨性可以提高其遇見雌蠅并交尾的幾率。
   本研究在mRNA水平上鑒定與EβF具有親和能力的OBP3在研究對象中均有表達。為EβF在寄主植物-蚜蟲-天敵的化學通訊中發(fā)揮

5、重要作用提供了分子生物學依據(jù)。
   2.OBP蛋白家族物種間的系統(tǒng)發(fā)育關系顯示其符合生滅模型(birth-and-death model),本研究在楓長鐮管蚜體內獲得2個僅存在5個氨基酸序列的差異的OBP3蛋白,為OBP蛋白家族起源說即昆蟲氣味結合蛋白家族起源于串聯(lián)基因倍增及基因突變提供了典型的實例。
   3.本研究涉及6個實驗對象,分別來自于半翅目、雙翅目和鞘翅目。所有實驗對象OBP3序列一致性>95%。依據(jù)生滅模

6、型推斷,OBP3的出現(xiàn)早于昆蟲綱向不同目的分散進化。
   4.本研究發(fā)現(xiàn),黑帶食蚜蠅雌性與雄性成蟲之間的OBP3表達在序列上存在一個氨基酸的差異。
   5.通過基于2D電泳技術的蛋白組學研究,在麥長管蚜體內鑒定10個嗅覺等感覺生理過程相關蛋白包括:Save Tol-1、Save Tol-2、Save Tol-3、Save Tol-4、Saor49a、Saor5、Saor5’、Saor7、Saveobp2b、Sagr2

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