1、維生素B6(VB6)是一類吡啶化合物的總稱，游離型為吡哆醇(pyridoxine，PN)、吡哆醛(pyridoxal，PL)和吡哆胺(pyridoxamine，PM)，對應的磷酸酯型為磷酸吡哆醇(pyridoxine-5-phosphate，PNP)、磷酸吡哆醛(pyridoxal-5-phosphate，PLP)和磷酸吡哆胺(pyridoxamine-5-phosphate，PMP)，其中PLP是VB6的主要輔酶形式，參與氨基酸代謝的

2、各種反應。吡哆醛激酶(pyridoxal kinase，PL 激酶)是VB6 代謝途徑中的關鍵酶，在金屬陽離子和ATP 存在下，催化PN、PL和PM分別形成PNP、PLP和PMP。PL 激酶與磷酸吡哆醇氧化酶、磷酸酶一起維持細胞內PLP 濃度穩(wěn)定，在VB6 代謝中發(fā)揮重要作用。
　　 家蠶(Bombyx mori)是蠶絲生產(chǎn)的重要經(jīng)濟昆蟲，VB6 對蠶體氨基酸代謝、脂肪酸代謝以及轉氨酶活力的影響較大。家蠶發(fā)育過程中，伴隨著蛋白質

3、短期內的大量降解和合成。當家蠶絲腺快速合成絲蛋白時，需要供給大量的氨基酸。桑葉蛋白質中富含谷氨酸和天冬氨酸，轉氨基作用在絲蛋白的合成過程中尤為顯著。
　　 PL 激酶是家蠶VB6 轉換代謝的關鍵酶，關系到絲蛋白合成的聯(lián)動調解機制。
　　 近幾年，本實驗室對家蠶PL 激酶進行cDNA克隆、原核表達并初步分析了酶學性質。前期研究克隆出家蠶吡哆醛激酶cDNA，經(jīng)序列比對發(fā)現(xiàn)幾個重要且保守的氨基酸殘基在此蛋白中被替換。為明確家蠶

4、PL 激酶分子若干特定位置上的氨基酸殘基在酶活性功能上的作用進行本研究。采用重疊延伸法對家蠶PL 激酶Thr47，Asn121，Ile54，Arg88和Trp230 氨基酸殘基進行定點突變，構建表達載體pET-22b-PL 激酶并轉入Escherichia coli Rosetta中進行誘導表達，經(jīng)親和層析對重組蛋白進行純化，通過酶活力檢測進行功能鑒定。家蠶PL 激酶Thr47、Ile54和Arg88 氨基酸殘基突變后酶催化活力分別下降