1、黃粉蟲在遇到低溫時會增高抗凍蛋白的表達(dá)，然而抗凍蛋白是一個基因家族，其中蛋白的長度和結(jié)構(gòu)存在著差異。在生物體的適應(yīng)過程中，哪種抗凍蛋白的基因的表達(dá)量更高，尚不清楚。本文對黃粉蟲抗凍蛋白基因家族，保守序列長度存在差異的基因進(jìn)行研究，選取了黃粉蟲抗凍蛋白基因家族中三個具有代表性的基因，NCBI數(shù)據(jù)庫編號分別為：AF160497，AF160496，AF160494，進(jìn)行了實(shí)時熒光定量PCR，測定其基因相對表達(dá)水平。處理如下,4℃下馴化4天、8

2、天、16天、24后，對上述三個基因的表達(dá)量進(jìn)行了測定，同時還進(jìn)行了4℃下低溫馴化4天、8天、16天、24天，經(jīng)-11℃處理后，黃粉蟲死亡率的統(tǒng)計。此外還進(jìn)行了抗凍蛋白的在真核細(xì)胞SF-9中的表達(dá)試驗(yàn)。主要研究內(nèi)容及結(jié)果如下：
　　 ⑴隨著黃粉蟲在4℃下的處理時間延長，經(jīng)-11℃處理后，黃粉蟲的死亡率呈現(xiàn)下降的趨勢,4天、8天、16天都有明顯的降低,24天處理樣本與16天處理樣本的差異不顯著。
　　 ⑵黃粉蟲4℃下馴化4天

3、、8天、16天，分別取樣對基因Af160497進(jìn)行RTPCR。基因Af160497的表達(dá)量，在4天取樣點(diǎn)表達(dá)量劇烈上升，而到了8天左右表達(dá)量則低于4天，經(jīng)過16天處理后基因的表達(dá)量繼續(xù)增加，總體呈現(xiàn)上升趨勢。
　　 ⑶黃粉蟲4℃下馴化4天、8天、16天，分別取樣對基因AF160496進(jìn)行RTPCR?；駻F160496的表達(dá)量，在4天取樣點(diǎn)有了較大提升，在8天和16天取樣現(xiàn)點(diǎn)，它的表達(dá)量持續(xù)走低。
　　 ⑷黃粉蟲4℃下馴

4、化4天、8天、16天，分別取樣對基因AF160494進(jìn)行RTPCR?；駻F160494的表達(dá)量，在4天的取樣點(diǎn)也是有了很大提升，在8天取樣的點(diǎn)表現(xiàn)出與基因Af160497表達(dá)量降低，在16天取樣點(diǎn)，該基因又恢復(fù)到4天取樣點(diǎn)的表達(dá)水平。
　　 ⑸通過對三個基因的對比，基因AF160494的整體表達(dá)量高于其他兩個處于主導(dǎo)地位，AF160496、AF160497基因表達(dá)水平相當(dāng)，顯著低于基因AF160494的表達(dá)水平。
　　

5、 ⑹檢測了冷馴化對低溫死亡率的效應(yīng)和對不同類型的抗凍蛋白家族成員基因表達(dá)量的影響。結(jié)果表明，冷馴化可以顯著降低黃粉蟲幼蟲的低溫死亡率和提高不同類型抗凍蛋白基因的表達(dá)量。其中，長的抗凍蛋白和低溫死亡率的相關(guān)關(guān)系最為明顯。說明不同的抗凍蛋白家族成員的功能有明顯的分化，為進(jìn)一步理解抗凍蛋白的活性和利用抗凍蛋白提供了新的認(rèn)識。
　　 ⑺真核SF-9細(xì)胞表達(dá)抗凍蛋白過程中，完成了載體構(gòu)建及桿粒的形成，并表達(dá)出一定蛋白，但得到的蛋白分子量大