1、百脈根(Lotus corniculatus L.)別名牛角花，是豆科百脈根屬多年生牧草，原產(chǎn)于歐亞溫暖地區(qū)，目前在世界各地廣泛種植。作為優(yōu)良飼草，百脈根營養(yǎng)含量居豆科牧草的首位，成熟收種后，蛋白質(zhì)含量可達(dá)17.4％。含皂素低，適口性好，耐牧性強(qiáng)，不會(huì)引起家畜膨脹病，為一般豆科牧草所不及。同時(shí)，百脈根也是建立人工草地、補(bǔ)播改良草場和建立人工放牧地的不可多得的牧草品種。近年從加拿大引進(jìn)的品種里奧(Leo)，抗寒性強(qiáng)，但其耐旱耐鹽特性較差，

2、難以適于國內(nèi)極端氣候日益頻發(fā)的環(huán)境。為解決這一難題，本研究對本實(shí)驗(yàn)室從沙生植物胡楊(Populuseuphratica)和鈴鐺刺(Halimodendron halodendron(Pall.)Voss.)中克隆的四個(gè)抗逆轉(zhuǎn)錄因子基因進(jìn)行了功能分析，從中篩選了2個(gè)高抗基因PeDREB2a和HhERF2，構(gòu)建單、雙價(jià)以生物安全標(biāo)記基因pmi為選擇標(biāo)記的植物表達(dá)載體，轉(zhuǎn)化百脈根Leo品種，以期提高其在抗旱耐鹽特性方面的能力，為我國畜牧業(yè)增添

3、新的優(yōu)良牧草種質(zhì)資源。主要研究結(jié)果如下：
　　 1.本研究以實(shí)驗(yàn)室從沙生植物胡楊和鈴鐺刺中克隆的PeDREB2a、PeDREB2b、HhDREB2和HhERF2四個(gè)抗逆相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子基因?yàn)榛A(chǔ)，構(gòu)建了分別含有PeDREB2a和PeDREB2b基因以誘導(dǎo)型啟動(dòng)子rd29A為啟動(dòng)子的植物表達(dá)載體：rd29A：：PeDREB2a和rd29A：：PeDREB2b(rd29A：：HhDREB2和rd29A：：HhERF2實(shí)驗(yàn)室已構(gòu)建)；

4、r>　　 2.將四個(gè)轉(zhuǎn)錄因子基因分別轉(zhuǎn)化模式植物擬南芥，通過潮霉素(Hyg)多代篩選獲得純合系轉(zhuǎn)基因擬南芥植株分別為：PeDREB2a(20株)、PeDREB2b(18株)、HhDREB2(23株)和HhERF2(27株)。研究中對轉(zhuǎn)基因擬南芥萌發(fā)期、幼苗期和生長期進(jìn)行干旱控水和鹽脅迫梯度實(shí)驗(yàn)，通過發(fā)芽率、含水量、可溶性糖、丙二醛(MDA)等抗逆指標(biāo)檢測，驗(yàn)證了四個(gè)轉(zhuǎn)錄因子在植物不同時(shí)期均提高了轉(zhuǎn)基因擬南芥對干旱和鹽脅迫的耐受力和適應(yīng)

5、性；
　　 3.結(jié)合四種轉(zhuǎn)基因擬南芥各種指標(biāo)結(jié)果的比較，發(fā)現(xiàn)PeDREB2a和HhE F2基因在植物抗逆調(diào)控中起到明顯的調(diào)控作用。因此，本研究在實(shí)驗(yàn)室已構(gòu)載體pCAMBIAl302-pmi的基礎(chǔ)上，構(gòu)建了pmi-rd29A：：PeDREB2a、pmi-rd29A：：HhERF2和pmi-PeDREB2a：：HhERF2三種單、雙價(jià)安全型植物表達(dá)載體，為安全型抗旱耐鹽百脈根轉(zhuǎn)基因植株的獲得打下基礎(chǔ)；
　　 4.將以上構(gòu)建的

6、三種單、雙價(jià)植物表達(dá)載體，通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)法轉(zhuǎn)化百脈根子葉，對通過甘露糖篩選的抗性植株進(jìn)行PCR和Southern-blotting檢測，結(jié)果表明，目的基因均已整合入牧草百脈根的基因組中。現(xiàn)已獲得轉(zhuǎn)pmi-rd29A：：PeDREB2a、pmi-rd29A：：HhERF2和pmi-PeDREB2a：：HhERF2百脈根植株7株、12株和5株(其他轉(zhuǎn)化事件還在檢測當(dāng)中)。干旱鹽堿脅迫處理，初步結(jié)果表明，轉(zhuǎn)錄因子基因PeDREB2a和HhER