1、本文用2-DE和iTRAQ對6只湖羊產(chǎn)后1 d、3 d、7 d、14 d、28 d和56 d的脫脂乳和乳清蛋白質(zhì)組進(jìn)行了分析，主要結(jié)果如下：
　?。?）湖羊不同泌乳時(shí)間脫脂乳蛋白質(zhì)組分析
　　將6只湖羊不同時(shí)間點(diǎn)全乳等體積混合，經(jīng)3,000×g離心獲得脫脂乳，用雙向電泳（2-DE）技術(shù)檢測脫脂乳蛋白。在6個(gè)時(shí)間點(diǎn)的脫脂乳樣中，共檢測出44個(gè)差異表達(dá)的蛋白點(diǎn)。對比薩爾達(dá)綿羊脫脂乳的研究結(jié)果，發(fā)現(xiàn)湖羊脫脂乳中蛋白主要包括α-乳白

2、蛋白、β-乳球蛋白、αS1-酪蛋白、αS2-酪蛋白、β-酪蛋白、κ-酪蛋白、白蛋白以及Ig重鏈前體。與1 d相比，3 d、7 d、14 d、28 d和56 d的差異蛋白點(diǎn)數(shù)分別為38、35、34、38和36。
　?。?）湖羊不同泌乳時(shí)間乳清蛋白質(zhì)組分析
　　將上述湖羊混合脫脂乳經(jīng)100,000×g超高速離心，獲得乳清蛋白，利用2-DE結(jié)合MALDI TOF/TOF質(zhì)譜技術(shù)進(jìn)行分離和鑒定。在6個(gè)時(shí)間點(diǎn)的乳清蛋白樣品中共檢測到4

3、1個(gè)差異蛋白點(diǎn)，對應(yīng)15種蛋白質(zhì)。其中6種蛋白已收錄在綿羊蛋白組學(xué)庫中，分別為κ-酪蛋白、αS1-酪蛋白變異體、叢生蛋白、α-1抗胰蛋白酶、氣道過氧化物酶和驅(qū)動(dòng)樣蛋白；其余9種蛋白已收錄于脊椎動(dòng)物蛋白數(shù)據(jù)庫，分別為Igμ鏈、補(bǔ)體 C3、多聚Ig受體亞型x2、IgG重鏈恒定區(qū)四聚體前體、核結(jié)合蛋白-1型x1、維生素D結(jié)合蛋白、角蛋白、糖基化依賴性細(xì)胞粘附分子1和肌動(dòng)蛋白細(xì)胞質(zhì)2亞型x1。
　　與1 d相比，3 d、7 d、14 d、

4、28 d和56 d的的差異蛋白點(diǎn)數(shù)分別為30、29、39、20和31。叢生蛋白在泌乳初期，豐度較高。14 d豐度迅速下降，28 d和56 d豐度降低到0。α-1抗胰蛋白酶豐度在14 d較高，其它時(shí)間點(diǎn)豐度較低。氣道過氧化物酶在泌乳初期豐度較高，7 d豐度迅速下降為0，之后上升，在56 d豐度又降為0。驅(qū)動(dòng)樣蛋白僅在7 d和14 d豐度較高，其它時(shí)間點(diǎn)豐度較低。補(bǔ)體 C3在1d豐度很高，之后豐度不規(guī)律變化。維生素D結(jié)合蛋白在1d、7d、2

5、8d豐度較高，3 d、14 d、56 d豐度較低。糖基化依賴性細(xì)胞粘附分子1僅在7 d和14 d時(shí)豐度較高。肌動(dòng)蛋白在1 d豐度較高，其后下降，28 d和56 d降為0。
　　（3）不同泌乳時(shí)間點(diǎn)湖羊乳蛋白質(zhì)組差異
　　用iTRAQ技術(shù)分析湖羊不同泌乳期的乳清蛋白，共檢出310個(gè)蛋白質(zhì)。其中有111種蛋白收錄于綿羊數(shù)據(jù)庫，199種蛋白收錄于脊椎動(dòng)物數(shù)據(jù)庫。6個(gè)時(shí)間點(diǎn)的差異蛋白為121個(gè)。熱圖分析表明121個(gè)差異蛋白的豐度隨時(shí)

6、間變化。與1 d相比，3 d、7 d、14 d、28 d和56 d的差異蛋白數(shù)分別為30、42、63、80和85。
　　將蛋白進(jìn)行GO功能注釋，對6個(gè)時(shí)間點(diǎn)乳清中差異蛋白進(jìn)行分類。根據(jù)分子功能分為9類，即結(jié)構(gòu)分子活性、轉(zhuǎn)錄因子活性、抗氧化劑活性、分子轉(zhuǎn)導(dǎo)活性、結(jié)合活性、轉(zhuǎn)運(yùn)活性、催化活性、趨化活性和分子調(diào)節(jié)功能。產(chǎn)后1d與3d差異蛋白分子功能分類最多；而3d與7d差異蛋白分子功能失去兩類，即轉(zhuǎn)錄因子活性和抗氧化劑活性；7 d與14

7、 d、14 d與28 d、28 d與56 d差異蛋白分子功能失去4類，即轉(zhuǎn)錄因子活性、抗氧化劑活性、結(jié)構(gòu)分子活性和趨化活性。
　　根據(jù)細(xì)胞定位，不同泌乳期差異蛋白分為9類，即細(xì)胞器、細(xì)胞、胞外區(qū)域、膜封閉腔、神經(jīng)元突觸、細(xì)胞連接、大分子復(fù)合物、細(xì)胞外基質(zhì)和膜。1d與3d差異蛋白分類最多。而3d與7d差異蛋白分類缺少神經(jīng)元突觸。7d與14d差異蛋白分類缺少神經(jīng)元突觸、細(xì)胞連接。14 d與28 d差異蛋白分類最少，但28 d與56 d

8、的差異蛋白分類增多，增加了大分子復(fù)合物和膜封閉腔。
　　根據(jù)生物途徑，差異蛋白分為17類，即發(fā)展過程、多細(xì)胞生物過程、細(xì)胞過程、單生物過程、生物附著、代謝過程、定位、細(xì)胞組成的組織、免疫系統(tǒng)、信號傳遞、行為反應(yīng)、刺激應(yīng)答、生長、轉(zhuǎn)移、生物調(diào)控、多生物過程和節(jié)律過程等。不同泌乳期，乳中差異蛋白在6類生物途徑中表現(xiàn)出較大變化，這些生物途徑分別為行為反應(yīng)、節(jié)律過程、生長、轉(zhuǎn)移、生物附著和多生物過程。
　　通過Pathway代謝通路