1、多不飽和脂肪酸(PUFAs)是細(xì)胞膜的重要組成成分，在機(jī)體的激素代謝和多種酶活性的調(diào)控中起著重要功能，一旦缺乏會(huì)引起機(jī)體生理失調(diào)而導(dǎo)致多種疾病，其中最具生物學(xué)功能的是ω-3PUFAs和ω-6 PUFAs。研究發(fā)現(xiàn)ω-6 PUFAs 對(duì)人體意義不大，其過(guò)量的攝入反而會(huì)危害人體健康。而ω-3 PUFAs 對(duì)人體卻有積極的意義，已被證實(shí)在預(yù)防和治療心血管疾病、關(guān)節(jié)炎、癌癥等多種疾病方面發(fā)揮著重要作用。由于哺乳動(dòng)物及人類不能在體內(nèi)合成ω-3 P

2、UFAs 與ω-6PUFAs，因此必須從食物中攝取來(lái)滿足需要。由于自然界中ω-6 PUFAs 含量豐富而ω-3 PUFAs 含量極少，導(dǎo)致人體中ω-6 PUFAs 攝入過(guò)多而ω-3 PUFAs 攝入嚴(yán)重不足，使人體中ω－6/ω－3之比高達(dá)16以上。而根據(jù)相關(guān)的研究，ω-6和ω-3 PUFAs的比例應(yīng)該在1 為適宜，所以人體通常處于ω-3 PUFAs 供應(yīng)不足的狀態(tài)。哺乳動(dòng)物體內(nèi)維持一定量的ω-3 PUFAs 可以起到預(yù)防心血管疾病、神經(jīng)

3、退行性疾病甚至癌癥的作用，ω-6 與ω-3PUFA的平衡對(duì)機(jī)體正常生長(zhǎng)和內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定有重要作用，如何增加人體ω-3 PUFAs的攝入量就成了合理利用脂肪酸的關(guān)鍵。
　　 Ω-3 脂肪酸去飽和酶基因是ω-3 PUFAs 合成的關(guān)鍵基因，它利用ω-6 PUFAs 為底物，在脂肪酸碳鏈甲基端第三個(gè)碳催化生成一個(gè)不飽和鍵，從而合成相應(yīng)的ω-3 PUFAs。
　　 Fat-1基因廣泛存在于真菌、植物和一些低等動(dòng)物中，它可以通過(guò)產(chǎn)生

4、出ω-3 脂肪酸脫氫酶將多不飽和脂肪酸從ω-6 轉(zhuǎn)化為ω-3 形式而發(fā)揮功能。研究人員已經(jīng)在轉(zhuǎn)基因動(dòng)物，如：小鼠、豬等，表達(dá)了Fat-1基因，這些研究為探索ω-3 PUFAs 功能提供了高效、準(zhǔn)確的醫(yī)學(xué)、營(yíng)養(yǎng)學(xué)動(dòng)物模型。
　　 本研究采用分子生物學(xué)等技術(shù)手段，研究線蟲ω-3 脂肪酸脫氫酶基因。根據(jù)Genbank中報(bào)道的線蟲Caenorhabditis Briggsae的ω-3 脂肪酸脫氫酶sFat-1基因序列，對(duì)其密碼子進(jìn)行優(yōu)化

5、，同時(shí)在sFat-1基因的上游引入增強(qiáng)子SP163序列，命名為SP163-sFat-1。
　　 人工合成SP163-sFat-1，然后進(jìn)行克隆、測(cè)序，結(jié)果序列正確。采用分子生物學(xué)技術(shù)，將SP163-sFat-1基因克隆在真核表達(dá)載體pcDNA3.1的CMV 啟動(dòng)子的下游，構(gòu)建了sFat-1基因的真核表達(dá)載體pCDNA3.1(+)-sFat-SP163。
　　 采用脂質(zhì)體介導(dǎo)法，將pCDNA3.1(+)-sFat-SP16

6、3 轉(zhuǎn)染CHO 細(xì)胞，同時(shí)用pCDNA3.1(+)作為對(duì)照。分別用G418 對(duì)轉(zhuǎn)染的CHO 細(xì)胞進(jìn)行抗性篩選，獲得了相應(yīng)的穩(wěn)定混合細(xì)胞系，陽(yáng)性率達(dá)90％以上。將pCDNA3.1(+)-sFat-SP163 轉(zhuǎn)染的細(xì)胞系命名為sFat-1-CHO，將pCDNA3.1(+)轉(zhuǎn)染的細(xì)胞命名為pCDNA3.1-CHO。分別采用熒光定量RT-PCR 方法和Western-blot 方法，對(duì)sFat-1-CHO 與pCDNA3.1-CHO 進(jìn)行檢測(cè)

7、，結(jié)果目的基因進(jìn)行了轉(zhuǎn)錄，比pCDNA3.1-CHO 高105以上；同時(shí)目的基因進(jìn)行了表達(dá)，sFat-1-CHO 成功表達(dá)了sFat-1蛋白，采用氣相色譜法，對(duì)sFat-1-CHO pCDNA3.1-CHO進(jìn)行脂肪酸分析，結(jié)果sFat-1-CHO中ω-3 PUFAs的含量比pCDNA3.1-CHO高，且ω-6/ω-3的比例下降，表明sFat-1-CHO表達(dá)的目的蛋白具有生物學(xué)活性。
　　 該研究為進(jìn)一步利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)促進(jìn)動(dòng)物自合