雞毒支原體JN株的分離鑒定及PCR檢測方法的建立.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、雞毒支原體(Mycoplasma Gallisepticum,MG)是雞的慢性呼吸道病(Chronic Respiratory Disease,CRD)的病原體,其特征為呼吸啰音、咳嗽、流漿液性鼻液,氣囊炎,嚴(yán)重時(shí)張口呼吸。通常與病毒、細(xì)菌協(xié)同感染,導(dǎo)致呼吸道癥狀加劇,使死亡率增高。MG感染在國內(nèi)禽群中相當(dāng)普遍,感染后雞死亡率一般很低,主要表現(xiàn)為產(chǎn)蛋率、孵化率降低,出欄期延長和飼料利用率降低,對(duì)該病的預(yù)防和控制程序也額外增加了成本,同時(shí)

2、造成禽產(chǎn)品中藥物殘留,給養(yǎng)禽業(yè)造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。
   本研究通過對(duì)山東濟(jì)南某雞場(舍)的患呼吸道疾病的雞進(jìn)行支原體的分離,通過菌落觀察及細(xì)菌L型恢復(fù)試驗(yàn),分離純化了一個(gè)支原體分離物。對(duì)所分離的支原體分離物進(jìn)行了菌落形態(tài)觀察、菌落紅細(xì)胞吸附試驗(yàn)、生理生化及血清學(xué)鑒定,結(jié)果該分離物被鑒定為雞毒支原體,命名為JN株。JN株在不含葡萄糖的液體培養(yǎng)基中,加入四氮唑能使培養(yǎng)基顏色變橙紅色,在固體培養(yǎng)基表面所形成的菌落呈典型的油煎蛋狀外觀

3、,大小約0.1~0.4mm,抗MG血清對(duì)JN株的代謝有抑制作用。
   通過JN株在不同血清培養(yǎng)基的生長情況,可以看出該菌株易于在豬血清培養(yǎng)基中生長,可以代替價(jià)格較貴且來源有限的馬血清。從MG對(duì)雞氣管環(huán)的致病性試驗(yàn)結(jié)果可看出JN菌株對(duì)氣管環(huán)纖毛的損傷較大,能夠引起雞胚氣管環(huán)纖毛運(yùn)動(dòng)快速停止,致病力較F疫苗株強(qiáng)。同時(shí),SDS-PAGE電泳圖譜顯示JN株、F株之間的蛋白條帶有一定差異,可以說明JN株的致病性與結(jié)構(gòu)蛋白之間存在一定的相

4、關(guān)性。
   針對(duì)雞毒支原體(MG)、雞滑液囊支原體(Mycoplasma synoviae,MS)和火雞支原體(Mycoplasma meleagridis,MM)設(shè)計(jì)了3對(duì)引物,大小分別為MG 732bp,MS 208bp,MM 850bp,通過單一PCR反應(yīng),分別得到了相應(yīng)的目的片段,并且建立的多重PCR反應(yīng)優(yōu)化后,可同時(shí)得到3條目的條帶,與單一PCR擴(kuò)增結(jié)果一致。實(shí)驗(yàn)表明,由此建立的多重PCR方法可用于MG、MS和MM的

5、同時(shí)檢測和鑒別診斷,且簡便快捷,靈敏度高,特異性強(qiáng)。
   針對(duì)雞傳染性支氣管炎病毒(IBV)、禽流感病毒(AIV)、雞新城疫病毒(NDV)和雞傳染性喉氣管炎病毒(ILTV)等4種主要呼吸道傳染病病原設(shè)計(jì)了4對(duì)特異性引物,大小分別為:IBV 1720bp、AIV 550bp、NDV 300bp、ILTV 647bp,與MG、MS建立多重RT-PCR,反應(yīng)優(yōu)化后可同時(shí)擴(kuò)增出了清晰的目的條帶。實(shí)驗(yàn)表明,建立的多重RT-PCR可用于混

6、合感染上述6種呼吸道傳染病病原的鑒別診斷。
   通過藥物浸泡法、溫差法和熏蒸法分別處理支原體污染嚴(yán)重的種蛋,出雛8周后對(duì)支原體抗體陽性率進(jìn)行檢測,結(jié)果為:百毒殺處理組13%,紅霉素處理組17%,溫差法處理組9%,熏蒸法處理組18%,而未經(jīng)處理的MG陽性種蛋支原體陽性檢出率卻高達(dá)86.4%,盡管孵化率有不同程度的下降,但都能夠顯著降低MG的垂直傳播。通過對(duì)孵化率、MG抗體檢出率和35日齡平均體重、110日齡平均體重等指標(biāo)進(jìn)行綜合

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