1、棉籽餅粕是一種重要的植物蛋白飼料資源，但是其中含有一種對動物有害的抗營養(yǎng)因子—棉酚，從而限制了其在飼料中的應用。目前，現(xiàn)有的一些脫毒方法，如有機溶劑萃取、硫酸亞鐵處理、微生物發(fā)酵等，對棉籽餅粕的解毒起到了一定的作用。尤其是微生物發(fā)酵降解棉酚，不僅可使棉籽餅粕脫毒，同時還可提高棉籽蛋白的營養(yǎng)價值。雖然棉籽餅粕發(fā)酵脫毒優(yōu)點已被公認，但是迄今為止，人們對微生物發(fā)酵脫毒的分子機理尚不清楚。本研究以純棉酚為碳源，從土壤中篩選了2株棉酚降解菌，采用

2、形態(tài)學觀察及分子生物學方法進行菌種鑒定，通過分析棉酚降解菌的培養(yǎng)條件對其生長特性進行初步探討，并利用蛋白質(zhì)組學技術分析棉酚降解菌在不同碳源中的蛋白質(zhì)表達差異。主要研究結果如下：
　　 1.以醋酸棉酚為唯一碳源，從土壤中篩選棉酚降解菌。從平板上得到2株高效降解棉酚的菌體，分別命名為AN-1、MM-2。從形態(tài)上觀察及電鏡結果顯示：AN-1和MM-2均為絲狀真菌。通過分子生物學方法對棉酚降解菌進一步鑒定表明：AN-1的18S rDNA

3、序列與黑曲霉(Aspergillus niger)的同源性高達99％以上，據(jù)此推測AN-1可能屬于A. niger；MM-2的18S rDNA序列與鐮刀霉屬(Fusarium)的同源性達98％以上，據(jù)此推測MM-2可能屬于Fusarium sp.。
　　 2.對分離到的棉酚降解菌進行培養(yǎng)特性研究，以獲得其最佳生長條件，為進一步研究奠定基礎。生長曲線試驗結果顯示：棉酚降解菌AN-1和MM-2表現(xiàn)出相似生長趨勢，即在葡萄糖中生長優(yōu)于

4、在棉酚中生長，培養(yǎng)60～84 h取種用于研究最好。溫度試驗結果顯示：棉酚降解菌AN-1和MM-2在棉酚及葡萄糖中的生長情況類似，即30℃時菌體生物量達最大值，且在葡萄糖中的生長略好于棉酚。pH試驗結果顯示：棉酚降解菌AN-1和MM-2在葡萄糖和棉酚中培養(yǎng)時pH值均呈下降趨勢，但在葡萄糖中較之棉酚中下降明顯。氮源試驗結果顯示：不同氮源對棉酚降解菌AN-1和MM-2的影響均有相似趨勢，即在銨鹽及硝酸鹽中生長比在酵母膏和尿素中好，且最佳氮源為

5、NaNO3。棉酚耐受性試驗結果表明：棉酚降解菌AN-1在5種不同濃度(0.05％,0.1％,0.2％,0.4％,0.8％)的棉酚中生長時具有明顯差異，且AN-1對棉酚具有極強的耐受性，確定棉酚最適添加量為0.2％。
　　 3.采用TCA/丙酮沉淀法提取棉酚降解菌AN-1在葡萄糖和棉酚中生長72h后的菌體蛋白，得到了分辨率較好的蛋白質(zhì)雙向電泳圖譜，蛋白質(zhì)分子量主要集中在25.0～66.2kDa之間，各pI段均有分布。通過PDQue

6、st軟件分析，葡萄糖凝膠圖譜中平均檢測到478個蛋白點，棉酚凝膠圖譜中平均檢測到592個蛋白點；以葡萄糖為參考膠，棉酚為碳源的2-DE圖譜中平均匹配的蛋白點為293個，未匹配的蛋白點有299個，其中有51個為差異蛋白點。采用MALDI-TOF MS方法對差異蛋白點進行質(zhì)譜鑒定，獲得了47張PMF圖譜，鑒定出其中20個蛋白點，包括1個kinesin,2個glycerol-3-phosphate dehydrogenase,1個citrat