1、黃瓜（CucumissativusL.）是一種重要的世界性蔬菜，也是設施中的主栽作物之一。其性喜溫，在早春和秋冬季節(jié)，低溫是影響黃瓜產(chǎn)量和品質(zhì)的主要因子，因此，耐低溫能力的提高成為黃瓜周年供應的關鍵環(huán)節(jié)，而培育高品質(zhì)的耐冷黃瓜品種則是解決這一問題的主要途徑。基因工程不僅可以打破黃瓜遺傳基礎狹窄、優(yōu)異基因缺乏的障礙，還具有育種周期短、耗資低、目的性強等特點，因此，利用轉(zhuǎn)基因的手段為更好、更快的改良黃瓜的耐冷品質(zhì)提供了技術支持。
　　

2、轉(zhuǎn)錄因子CBF（C-repeatBindingFactor）是植物感受低溫信號并調(diào)節(jié)自身適應性反應途徑上最重要的“分子開關”，該基因可激活下游多個耐冷相關功能基因的表達來提高植物對低溫的抗性。鑒于其在植物耐冷過程中的重要作用，克隆黃瓜CBF3基因并研究其在低溫脅迫下的表達情況，可明確該基因在黃瓜中的功能，進一步闡釋黃瓜耐冷的分子機理。同時利用基因工程技術將其轉(zhuǎn)入黃瓜中可顯著提高黃瓜的耐冷能力，為黃瓜耐冷育種提供新的種質(zhì)資源。
　　

3、基于上述背景及意義，本文克隆了黃瓜轉(zhuǎn)錄因子CsCBF3基因并開展了相關的遺傳轉(zhuǎn)化研究，具體內(nèi)容及結(jié)果如下:
　　1.黃瓜轉(zhuǎn)錄因子CsCBF3的克隆及表達分析
　　利用RT-PCR技術從黃瓜中克隆了CsCBF3基因，GenBank登錄號為JQ900769。CsCBF3基因開放閱讀框全長為615bp，編碼204個氨基酸。進化樹分析表明CsCBF3隸屬于CBF基因家族，與葡萄CBF3蛋白親緣關系最近。生物信息學分析結(jié)果表明，CsC

4、BF3編碼的蛋白包含保守的AP2DNA結(jié)合域，N端的核定位信號區(qū)和C端的酸性氨基酸富集區(qū)。熒光定量PCR檢測結(jié)果顯示低溫可誘導CsCBF3的表達，且其表達量在迅速達到峰值后又降低，說明CsCBF3是一個快速響應基因，推測其在黃瓜耐冷過程中起著重要的作用。
　　2.乙酰丁香酮及共培養(yǎng)pH對黃瓜遺傳轉(zhuǎn)化效率的影響
　　以黃瓜品種‘長春密刺’子葉節(jié)為外植體，研究了乙酰丁香酮的添加方式、濃度及共培養(yǎng)pH值對黃瓜遺傳轉(zhuǎn)化效率的影響。試

5、驗結(jié)果表明:在菌液和共培養(yǎng)基中加入乙酰丁香酮均可顯著提高黃瓜抗性芽誘導率，濃度以100μmol/L效果最佳。不同的共培養(yǎng)pH條件對黃瓜抗性芽誘導率也有影響，在pH5.2的共培養(yǎng)基上黃瓜轉(zhuǎn)化率最高。
　　3.CsCBF3基因表達載體的構(gòu)建及對黃瓜的轉(zhuǎn)化
　　根據(jù)CsCBF3基因的開放閱讀框序列設計特異引物，利用雙酶切的方法將CsCBF3基因插入到植物雙元表達載體pCAMBIA1304上，并通過凍融法把重組質(zhì)粒導入到農(nóng)桿菌菌株E