1、膽固醇代謝與肝脂肪變性密切相關(guān)，目前很少有關(guān)于外源性膽固醇對細(xì)胞水平的肝內(nèi)膽固醇及脂肪酸代謝影響及其機(jī)制的報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)為了研究膽固醇在肝細(xì)胞脂肪變性過程中的作用，以15日齡四川白鵝和朗德鵝原代肝細(xì)胞為材料，檢測了外源性膽固醇對肝細(xì)胞內(nèi)甘油三酯(TG)，總膽固醇(TC)含量的影響，并采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測膽固醇與脂肪酸代謝過程中的關(guān)鍵調(diào)控基因FAS、HMGR、SREBP-1/2mRNA表達(dá)的變化情況，獲得以下主要結(jié)果： (1)

2、采用Selgon二步灌流法能夠很好的分離純化鵝肝細(xì)胞，平均每只鵝能提取鵝肝細(xì)胞6×107細(xì)胞，細(xì)胞活率達(dá)到90％以上。 (2)10～30μg/ml膽固醇均能顯著促進(jìn)兩個(gè)品種鵝肝細(xì)胞中TG合成(P<0.05)。其中20μg/ml的膽固醇促進(jìn)作用最為明顯；隨膽固醇培養(yǎng)時(shí)間的增加，細(xì)胞中TG含量也逐漸增加，其中48h達(dá)到最高，與培養(yǎng)0、12、24h后細(xì)胞中TG相比，差異顯著(P<0.05)，與培養(yǎng)72h相比，差異不顯著(P>0.05)

3、；而各處理組中朗德鵝TG含量顯著高于四川白鵝(P<0.05)。 (3)10～30μg/ml顯著增加了鵝肝細(xì)胞中的SREBP-1mRNA的水平(P<0.05)，其中20μg/ml的膽固醇促進(jìn)作用最為明顯；同時(shí)隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長，SREBP-1的表達(dá)量呈現(xiàn)上升趨勢，其中48h表達(dá)量達(dá)到最高，與培養(yǎng)0、12、24h的表達(dá)量相比，差異顯著(P<0.05)，與培養(yǎng)72h相比，差異不顯著(P>0.05)；兩品種鵝各處理組間比較，朗德鵝SRE

4、BP-1mRNA表達(dá)量顯著高于四川白鵝(P<0.05)。 (4)10～30μg/ml膽固醇對生脂關(guān)鍵基因FAS的表達(dá)有促進(jìn)作用，顯著增加了FASmRNA的表達(dá)水平(P<0.05)，其中20μg/ml的膽固醇促進(jìn)效果最為顯著。隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長，F(xiàn)AS的表達(dá)量呈現(xiàn)上升趨勢，48h表達(dá)量達(dá)到最高，與培養(yǎng)0、12、2h的表達(dá)量相比，差異顯著(P<0.05)，與培養(yǎng)72h相比，差異不顯著(P>0.05)；兩品種鵝各處理組間比較，朗德鵝F

5、ASmRNA表達(dá)量顯著高于四川白鵝(P<0.05)。 (5)不同濃度膽固醇處理后，兩品種鵝肝細(xì)胞中TC含量變化均不顯著(P>0.05)；隨膽固醇處理時(shí)間的增加，細(xì)胞中TC含量開始呈上升趨勢，24h達(dá)到最高，與對照組相比，差異顯著(P<0.05)；24h后，TC含量開始下降，72h后，與對照相比，差異不顯著(P>0.05)而兩品種鵝各處理組之間相比，朗德鵝肝細(xì)胞中TC含量要顯著高于四川白鵝(P<0.05)。 (6)10～3

6、0μg/ml膽固醇顯著降低了兩個(gè)品種鵝肝細(xì)胞中的SREBP-2mRNA的水平(P<0.05)，其中20μg/ml的膽固醇降低效果最為明顯；隨培養(yǎng)時(shí)間的延長，SREBP-2的表達(dá)量呈下降趨勢，其中培養(yǎng)48h的表達(dá)量最低。與培養(yǎng)0、12、24h的表達(dá)量相比，差異顯著(P<0.05)，與培養(yǎng)72h相比，差異不顯著(P>0.05)；兩品種鵝各處理組間比較，SREBP-2mRNA表達(dá)量間沒有顯著差異(P>0.05)。 (7)10～30μg

7、/ml膽固醇顯著降低了兩鵝肝細(xì)胞中的HMGRmRNA的水平(P<0.05)，其中20μg/ml的膽固醇降低效果最為明顯；隨培養(yǎng)時(shí)間的延長，HMGR的表達(dá)量呈下降趨勢，其中培養(yǎng)48h的表達(dá)量最低。與培養(yǎng)0、12、24h的表達(dá)量相比，差異顯著(P<0.05)；與培養(yǎng)72h相比，差異不顯著(P>0.05)；兩品種鵝各處理組間HMGRmRNA表達(dá)量沒有顯著差異(P>0.05)。 (8)兩品種鵝肝細(xì)胞中的TG含量與膽固醇濃度存在一定正相關(guān)

8、，但相關(guān)不顯著(P>0.05)，而與膽固醇處理時(shí)間存在顯著正相關(guān)(P<0.05)；SREBP-1mRNA表達(dá)量與膽固醇濃度存在一定正相關(guān)，但相關(guān)不顯著(P>0.05)，而與膽固醇處理時(shí)間存在顯著正相關(guān)；FASmRNA表達(dá)量與膽固醇濃度及處理時(shí)間均存在顯著正相關(guān)(P<0.05)；FASmRNA表達(dá)量與SREBP-1mRNA表達(dá)量間存在極顯著正相關(guān)(P<0.01)。 (9)兩品種鵝肝細(xì)胞中TC含量與膽固醇濃度及處理時(shí)間均不存在顯著性